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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取质粒遇到多条带，求助
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applezhao

金虫 (小有名气)

[交流] 提取质粒遇到多条带，求助 已有10人参与

大家好，想求助一下大家，我是在BL21里提取的质粒，质粒是PGEX-2T.第一张图是第一次跟第二次提取的结果，我在网上查了一下说可能是提取的过程中不够轻柔，所以我第三次第四次（第二张图）提取的时候注意了这些问题，但是不知道怎么回事，就两管出现了5000bp的片段，实在找不出原因了，求助，谢啦
第一张图7个条带的maker是DL10000，第二张maker也是DL10000
提取质粒遇到多条带，求助
左边是第二次提的质粒右边是第一次提的质粒1.gif


提取质粒遇到多条带，求助-1
zl1.gif
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命里有时终须有，命里无时莫强求
1楼 2013-11-14 16:54:46
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先，BL21是表达质粒，它不是recA mutant，你提取的时候，要记得用PB好好洗。

其次，质粒提取之后，大小不能完全用跑胶判断，一定要做酶切，至于是单还是双还是更多的酶切，由你质粒的酶切图谱决定。

最后，提取质粒，最后是溶解在elution buffer里的，也就是10mM Tris，直接切就可以。
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20楼2014-05-07 03:51:15
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chjinzhi

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-15 10:26:06
提取出来的质粒没有做酶切，直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小，就要先在酶切，然后去跑电泳。
因为，你提取出来的质粒的螺旋程度不一样，条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种，条带也可能有多条。
所以，你在质粒上选个只有一个酶切位点的酶进行酶切，然后把酶切产物拿去跑电泳。若在5000bp处有条带，就说明你提的是成功的。
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2楼2013-11-14 18:54:05
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applezhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-14 18:54:05
提取出来的质粒没有做酶切，直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小，就要先在酶切，然后去跑电泳。
因为，你提取出来的质粒的螺旋程度不一样，条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种 ...

那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧？还是直接拿提取的质粒做酶切？谢谢啊
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命里有时终须有，命里无时莫强求
4楼2013-11-14 20:56:55
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爱的天使13

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 20:56:55
那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧？还是直接拿提取的质粒做酶切？谢谢啊...

直接切
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5楼2013-11-14 22:14:32
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