24小时热门版块排行榜    

查看: 2832  |  回复: 8
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
已阅   同方向广播   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
回帖置顶 ( 共有1个 )

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-09-04 06:17:01
silicare: BioEPI+1 2013-09-04 08:26:01
zq191236086: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-04 14:19:40
如果你菌液浓度达到0.6以上,并取1 ml进行提取,如果提取过程中没有损失的话,你的载体的copy数存在下降。可以考虑复壮一下。在高浓度Amp平板上进行划线,然后挑取最快长出菌落的单克隆!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
3楼2013-09-03 23:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-09-03 06:17:21
zq191236086: 金币+5, 有帮助 2013-09-03 12:09:55
T载体是高用于克隆的拷贝质粒,pET32a是用来表达蛋白的,拷贝数低。一般多收点菌裂解就可以了。
2楼2013-09-03 00:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T载体本身就可大量复制的,表达载体拷贝较少;但是依然可以提取到大量质粒的。你用的那种菌株?我们实验用的TG1,过夜培养提的质粒浓度很高;用试剂盒精抽,双酶切1-2ul即可。
4楼2013-09-04 17:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

pET2832是表达载体,算是低拷贝的质粒,所以提取的时候菌浓度要相应地增加,特别有些质粒还是在BL21里面,质粒会更加地不好提。
我一般是把表达载体转化到克隆宿主中,提取的时候多用一倍的菌液,但是还是分开裂解,到离心完之后把上清合并到同一个纯化柱中继续纯化。要是菌液量加大,但裂解液还是一样的话,可能会出现裂解不完全,毕竟裂解液用量是针对菌,而不是菌里面的质粒拷贝数

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你的日子如何,你的力量也必如何!
5楼2013-09-05 11:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
6楼2013-09-05 16:39:23
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (小有名气)

送红花一朵
本帖仅楼主可见
7楼2013-09-29 19:41:25
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
8楼2013-09-29 19:43:05
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

514278815

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zq191236086 at 2013-09-29 19:43:05
您好,我用的菌是BL21,过夜培养,自己配制的溶液提取的。
实验室的一个师兄用试剂盒提取的,提取量也很少...

BL21菌株提取质粒浓度不会高的,我也提过;你最好换个菌株。
9楼2013-09-30 12:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zq191236086 的主题更新
信息提示
请填处理意见