24小时热门版块排行榜    

查看: 3325  |  回复: 8
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   同方向广播   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

sxxuan

金虫 (著名写手)

pET2832是表达载体,算是低拷贝的质粒,所以提取的时候菌浓度要相应地增加,特别有些质粒还是在BL21里面,质粒会更加地不好提。
我一般是把表达载体转化到克隆宿主中,提取的时候多用一倍的菌液,但是还是分开裂解,到离心完之后把上清合并到同一个纯化柱中继续纯化。要是菌液量加大,但裂解液还是一样的话,可能会出现裂解不完全,毕竟裂解液用量是针对菌,而不是菌里面的质粒拷贝数

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你的日子如何,你的力量也必如何!
5楼2013-09-05 11:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-09-03 06:17:21
zq191236086: 金币+5, 有帮助 2013-09-03 12:09:55
T载体是高用于克隆的拷贝质粒,pET32a是用来表达蛋白的,拷贝数低。一般多收点菌裂解就可以了。
2楼2013-09-03 00:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-09-04 06:17:01
silicare: BioEPI+1 2013-09-04 08:26:01
zq191236086: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-04 14:19:40
如果你菌液浓度达到0.6以上,并取1 ml进行提取,如果提取过程中没有损失的话,你的载体的copy数存在下降。可以考虑复壮一下。在高浓度Amp平板上进行划线,然后挑取最快长出菌落的单克隆!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
3楼2013-09-03 23:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T载体本身就可大量复制的,表达载体拷贝较少;但是依然可以提取到大量质粒的。你用的那种菌株?我们实验用的TG1,过夜培养提的质粒浓度很高;用试剂盒精抽,双酶切1-2ul即可。
4楼2013-09-04 17:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见