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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒怎么会提不出来'?
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 质粒怎么会提不出来'?

用试剂盒小提质粒时，从来没遇到过的现象：加完buffer2混匀，有些不清楚，以为正常，加完3混匀，不是明显的白色沉淀，而是整体的蛋白胶状物，离心12000rpm，10分钟，没离下东西，只是有透明丝状物
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寻找方向，前进
1楼 2011-11-03 21:10:17
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王玉民

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

junxiao0320(金币+1): 2011-11-04 08:21:29
junxiao0320(金币+1): 2011-11-04 08:21:48
junxiao0320(金币+1): 2011-11-05 18:48:01
试剂盒用久了吧，那个buffer2是氢氧化钠和SDS，开口时间长了与空气中的二氧化碳反应了，也可能是3有问题了。换换试剂盒试试。要不就是菌不对。
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心晴
2楼2011-11-03 21:33:53
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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)

疯子
细菌本身的问题吧
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开开心心做科研，踏踏实实做好人。
3楼2011-11-03 22:07:21
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longrna

新虫 (正式写手)
加完Buffer 2不澄清可能有以下原因，
1.buffer 2失效，但一般plasmid kit 保持期有1年，除非你kit太久，否则此可能性不大。
2.菌的问题。可能你养的菌有杂菌也会出现buffer 2不澄清的情况。
（另外，你buffer 1 2 3加时没搞错吧？）

你可以同时做一个确定没问题的菌(即我们常说的对照)来排除是kit还是你菌的问题。
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伟大航线....
4楼2011-11-04 09:28:04
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shengdeqiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

junxiao0320(金币+2): 2011-11-05 18:48:04
有可能菌种已被污染。
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5楼2011-11-05 08:33:41
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生
菌种污染吗？我需要划线试试？、
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6楼2011-11-05 18:47:30
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
我前段时间出现了这种情况，3次，后面发现是杂菌。是因为LB里的抗生素失效了才长起来的。。。同样的试剂盒，换正确的菌就没有那种胶状的东西了。
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7楼2011-11-05 23:46:10
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生
引用回帖:
7楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-05 23:46:10:
我前段时间出现了这种情况，3次，后面发现是杂菌。是因为LB里的抗生素失效了才长起来的。。。同样的试剂盒，换正确的菌就没有那种胶状的东西了。

我的菌很奇怪，DH5α-pUC57 在氨苄板上不长，在氨苄试管里长的很好，提质粒就出现上面的状况
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寻找方向，前进
8楼2011-11-07 10:15:31
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ideal9268

铜虫 (小有名气)
1.确定你的buffer都没问题。
2.是不是质粒量太大，加的buffer不够？
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9楼2011-11-07 14:58:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-11-21 11:12:26
引用回帖:
8楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-11-07 10:15:31:
我的菌很奇怪，DH5α-pUC57 在氨苄板上不长，在氨苄试管里长的很好，提质粒就出现上面的状况

那有可能是你的液体培养基有问题，氨苄失效了，长起来的是杂菌。你在液体培养基里摇了多久才长起来？超过12小时才开始变浑浊的话肯定有问题了。
试试拿新加了氨苄的培养基来摇看看，如果是杂菌应该长不起来的。
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10楼2011-11-07 16:47:18
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