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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何提取农杆菌质粒
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guorongrong

铜虫 (正式写手)

[求助] 如何提取农杆菌质粒

用载体转化了农杆菌，现在需要检测一下是否转化成功，请问如何提取农杆菌质粒？
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1楼 2011-04-20 19:23:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 15:46:37
西瓜(金币+1, EPI+1): 鼓励。能不能说详细点呢？比如加入溶菌酶的量，消化的时间等。 2011-04-21 17:05:46
农杆菌的质粒提取要比普通质粒提取多一步消化，可以在加入溶液一后加入溶菌酶，消化一段时间后在加入溶液二，这样裂解效果比较好，一般农杆菌提出的质粒浓度都不是很大。
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2楼2011-04-21 14:11:49
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 谢谢交流 2011-04-21 15:47:01
guorongrong(金币+1): 2011-04-21 19:35:21
同意楼上。
师兄说，就算提取了，酶切也不太好。当时的做法是提取质粒后回传大肠杆菌再重新PCR和提取质粒酶切。那个麻烦啊～
希望有人可以点条明路，省去那么多的麻烦事～
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你的日子如何，你的力量也必如何！
3楼2011-04-21 15:46:19
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邓远洪dyh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-24 14:24:50
guorongrong(金币+2): 2011-05-24 09:22:03
直接做一个菌液PCR就可以了，用菌液做模板
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5楼2011-04-24 14:11:33
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普通回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 很热心哦！ 2011-04-21 19:11:16
guorongrong(金币+2): 2011-04-21 19:34:57
粗放点的实验可以加入50个单位的溶菌酶室温放置20分钟在进行提取。
也可以在收集菌体后用山梨酸缓冲液重悬加入溶菌酶30度水浴30分钟，离心收集在进行后续实验。
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4楼2011-04-21 17:37:55
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花的泪

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议直接用转化过的农杆菌菌液做PCR，做正负对照即可
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6楼2011-04-29 16:53:51
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以直接采用菌液pcr，就是pcr的时候挑去菌落于体系中，第一步变性的时间延长1-2min，将菌裂解，用于鉴定，非常方便的，楼主可以试试看。
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风雪夜归人
7楼2011-04-29 17:37:05
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pushizi

木虫 (小有名气)

pushizi
学习了！好贴！刚好遇到这个问题！
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但愿快乐不停歇，悲伤不再来~
8楼2012-03-11 20:22:05
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272401213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1134879楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-04-29 17:37:05
可以直接采用菌液pcr，就是pcr的时候挑去菌落于体系中，第一步变性的时间延长1-2min，将菌裂解，用于鉴定，非常方便的，楼主可以试试看。

菌液PCR，P不出来啊！
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YNWA
9楼2012-06-20 10:44:29
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
不会是质粒丢失了吧，这个是最可怕的，如果是这样的话，你的农杆菌就废了，建议楼主重新复苏前一批保存的，再试试，菌液pcr还是没什么大的问题的
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风雪夜归人
10楼2012-06-21 11:47:50
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