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guorongrong

铜虫 (正式写手)

[求助] 如何提取农杆菌质粒

用载体转化了农杆菌,现在需要检测一下是否转化成功,请问如何提取农杆菌质粒?
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邓远洪dyh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-24 14:24:50
guorongrong(金币+2): 2011-05-24 09:22:03
直接做一个菌液PCR就可以了,用菌液做模板
5楼2011-04-24 14:11:33
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 15:46:37
西瓜(金币+1, EPI+1): 鼓励。能不能说详细点呢?比如加入溶菌酶的量,消化的时间等。 2011-04-21 17:05:46
农杆菌的质粒提取要比普通质粒提取多一步消化,可以在加入溶液一后加入溶菌酶,消化一段时间后在加入溶液二,这样裂解效果比较好,一般农杆菌提出的质粒浓度都不是很大。
2楼2011-04-21 14:11:49
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 谢谢交流 2011-04-21 15:47:01
guorongrong(金币+1): 2011-04-21 19:35:21
同意楼上。
师兄说,就算提取了,酶切也不太好。当时的做法是提取质粒后回传大肠杆菌再重新PCR和提取质粒酶切。那个麻烦啊~
希望有人可以点条明路,省去那么多的麻烦事~
你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼2011-04-21 15:46:19
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 很热心哦! 2011-04-21 19:11:16
guorongrong(金币+2): 2011-04-21 19:34:57
粗放点的实验可以加入50个单位的溶菌酶室温放置20分钟在进行提取。
也可以在收集菌体后用山梨酸缓冲液重悬加入溶菌酶30度水浴30分钟,离心收集在进行后续实验。
4楼2011-04-21 17:37:55
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