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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取后出现两条亮度相同的带，谁帮我看一下。。。。。。。
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gbtgwm

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取后出现两条亮度相同的带，谁帮我看一下。。。。。。。

本人最近在做稳定表达单克隆，但总是有一部分细胞既没有荧光也不会被杀死，百思不得其解，所以跑了一下提取的质粒，最后跑出两条亮度相同的条带，不知道是所说的质粒的不同状态还是什么的，大家帮我分析一下。
质粒我用的是pEGFP-c1，目的片段900bp，试剂盒用的Qiagen小提。

试剂盒提的重组质粒
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1楼 2012-06-17 15:46:58
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eykong2005

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-18 13:36:30
这很正常，质粒没有酶切前有几种状态，有些是coil，还有是super coil的，所以一般会看到2条带。有个办法可以帮你解惑，选个单酶切位点，再跑胶，就会是一条带了，因为都是线性状态。
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2楼2012-06-17 18:01:02
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的好哇。质粒也是有螺旋状态的。
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哦也
3楼2012-06-17 23:55:42
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timyang14

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:33:13
2楼说的对，要是质粒提取没有问题的话，有可能出两个条带，一个应该是一条链有缺口的开环DNA，另一个为超螺旋，但是这两个在凝胶上的结果都应该小于DNA长度的理论值，单酶切之后的结果应该是和理论大小一致，
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Fighttilldeath
4楼2012-06-20 14:41:25
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by timyang14 at 2012-06-20 14:41:25
2楼说的对，要是质粒提取没有问题的话，有可能出两个条带，一个应该是一条链有缺口的开环DNA，另一个为超螺旋，但是这两个在凝胶上的结果都应该小于DNA长度的理论值，单酶切之后的结果应该是和理论大小一致，

有缺口的跑的比线性的要慢
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5楼2012-06-20 20:42:29
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wodi5230

铁虫 (初入文坛)
哈哈，受教了
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6楼2012-06-22 20:20:58
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gbtgwm

新虫 (初入文坛)
结果是菌种4°C放太久了，质粒变异或降解了，两条最亮的带都没有目的片段，继续跑两条带之后还能跑出一条弥散的带，带有目的。我已经重新用保藏菌种提了质粒，只有一条带了。
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7楼2012-07-01 11:00:58
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