应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？
201/2返回列表12下一页
查看: 3438  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

静音0108

银虫 (初入文坛)

[求助] 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？

众位虫子们  帮帮忙啊  谁遇到过这种状况  
质粒和DNA片段做双酶切后  跑胶后什么都没有  一片空白。用于酶切的质粒和片段在酶切前跑胶是有条带的 ，为何切后什么都没了？我37℃酶切了7小时，即使是时间过长了 ，也应该有弥散的吧？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-18 21:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:00
你电泳时有没有酶切的质粒或DNA对照吗？不会是没加EB吧？
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-18 21:57:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:13
没带MARKER？完全空白估计是忘记加EB了吧
赞一下 回复此楼
高山仰止，景行行止，虽不能至，心向往之。
3楼2012-09-18 23:13:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:27
你用MARKER，酶切前后产物，一起跑一下。7个小时感觉时间太长了，酶的活性很高，3个小时感觉就可以了
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-18 23:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bclz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:00:58
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:36
质粒和DNA的质量怎样？如果没问题的话，那就是胶或者跑电泳的问题，点样漏了或者是缓冲液用的时间太久了，或者就像楼上所说，没加EB或者EB失效了。另外，酶切7小时是有点长，我们一般三小时就OK了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-19 10:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-21 14:17:13
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:43
个人感觉楼主可以从以下几个方面来判断一下：第一是看溴酚蓝是否跑走了，如果跑走了，应该电泳缓冲液就没有问题；第二是加大一下上样量，有时候酶切过后的条带比未酶切的条带要弱（我也碰到这样的问题，不清楚为什么）；第三是如楼上所说，点上未经酶切的质粒和片段作为对照。如果还是跑不出来，建议楼主用自己的引物以酶切产物为模板做下PCR，看是否是因为片段降解的问题。希望能帮到你！
赞一下 回复此楼
努力！
6楼2012-09-19 16:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-09-18 21:57:10
你电泳时有没有酶切的质粒或DNA对照吗？不会是没加EB吧？

同一块胶上另一半跑的pcr产物都有带 ，就只是酶切的没有条带
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-20 15:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 尚慕寒 at 2012-09-18 23:13:02
没带MARKER？完全空白估计是忘记加EB了吧

marker有的，EB加了
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-20 15:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-18 23:48:57
你用MARKER，酶切前后产物，一起跑一下。7个小时感觉时间太长了，酶的活性很高，3个小时感觉就可以了

我第二天切了两个小时，依然什么也没有，主要是我那是个混合酶切位点，时间短了 ，怕是切不开
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-20 15:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bclz at 2012-09-19 10:39:26
质粒和DNA的质量怎样？如果没问题的话，那就是胶或者跑电泳的问题，点样漏了或者是缓冲液用的时间太久了，或者就像楼上所说，没加EB或者EB失效了。另外，酶切7小时是有点长，我们一般三小时就OK了。

质粒和DNA的片段都取2ul上过样了的，有条带，DNA片段的虽然较浅，看还是能看清的。胶上另一半跑的其它东西有条带，一连5个孔都漏了的可能性也不大吧 毕竟同一块胶上另一半的没有漏。
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-20 16:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静音0108 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭