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静音0108

银虫 (初入文坛)

[求助] 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事?

众位虫子们  帮帮忙啊  谁遇到过这种状况  
质粒和DNA片段做双酶切后  跑胶后什么都没有  一片空白。用于酶切的质粒和片段在酶切前跑胶是有条带的 ,为何切后什么都没了?我37℃酶切了7小时,即使是时间过长了 ,也应该有弥散的吧?
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skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-21 14:17:13
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:43
个人感觉楼主可以从以下几个方面来判断一下:第一是看溴酚蓝是否跑走了,如果跑走了,应该电泳缓冲液就没有问题;第二是加大一下上样量,有时候酶切过后的条带比未酶切的条带要弱(我也碰到这样的问题,不清楚为什么);第三是如楼上所说,点上未经酶切的质粒和片段作为对照。如果还是跑不出来,建议楼主用自己的引物以酶切产物为模板做下PCR,看是否是因为片段降解的问题。希望能帮到你!
努力!
6楼2012-09-19 16:11:48
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