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静音0108

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by skuy1223 at 2012-09-19 16:11:48
个人感觉楼主可以从以下几个方面来判断一下:第一是看溴酚蓝是否跑走了,如果跑走了,应该电泳缓冲液就没有问题;第二是加大一下上样量,有时候酶切过后的条带比未酶切的条带要弱(我也碰到这样的问题,不清楚为什么 ...

跑胶的时候我的酶切产物全部加进去了,共30ul。30ul的酶切体系中,DNA片段用了20ul的,量应该够大了吧。质粒用了5ul的,体系是20ul,也是全部上样了的,可是就是什么都没有
另外,用酶切产物做pcr是怎么个意思?如果是pcr没条带就是降解了?
11楼2012-09-20 16:06:28
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-21 14:17:29
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:58:12
这个问题我也碰到过,主要我的原因是质粒的浓度太低,然后酶切时间又比较长,我过夜酶切的,楼主可以试试加大质粒浓度,然后酶切时间短一点,如果只是验证的话,没有必要完全切开,有目的条带就可以.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
12楼2012-09-20 16:35:07
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尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:43:43
引用回帖:
8楼: Originally posted by 静音0108 at 2012-09-20 15:56:10
marker有的,EB加了...

你这属于灵异事件了,要不在实验室烧烧香啥的。。。
开玩笑,你说DNA片段条带比较淡,那加大一点量试试吧。。。
高山仰止,景行行止,虽不能至,心向往之。
13楼2012-09-20 16:50:12
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黑色de星期⑧

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:43:53
是不是酶或者buffer你用错了,再仔细看看酶切位点,上面几楼所说的都是主要原因,如果没有错了,那就不知道了
14楼2012-09-20 19:53:36
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changyi_23

金虫 (小有名气)

酶切时间不会嫌长吧 我们都酶切过夜的呢 结果呀还好~
15楼2012-09-21 08:47:40
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李蓝莓

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我要遇到了这个问题,切了几次后都是没带 郁闷了,
16楼2013-01-15 23:06:26
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崔t-o-p

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得酶切时间长,把质粒降解了不太可能,酶切之前是纯质粒浓度肯定客观, 酶切加了那么多体系,相当于稀释了你的质粒浓度。再上样电泳,看不清也是可能的。。我之前也是电泳鉴定没有看到条带,愣是连上了。。祝你好运。。
17楼2013-03-19 10:09:40
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 李蓝莓 at 2013-01-15 23:06:26
我要遇到了这个问题,切了几次后都是没带 郁闷了,

我现在也遇到这个问题,不知道这位同学你解决这个问题了吗??我是一直都受这个困扰啊
18楼2013-06-24 22:05:05
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

楼主你的这个问题不知道解决了没有,我一连3周都是这样,怎么回事??
19楼2013-06-24 22:07:36
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

量可能太少了,,胶回收有一定的效率,,最好加洗脱液的量应该不少。相应的浓度就低了。上的样可能没跑出来。,。测下浓度再加相依的量跑试试。。祝好
20楼2013-06-25 09:29:52
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