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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？
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静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by skuy1223 at 2012-09-19 16:11:48
个人感觉楼主可以从以下几个方面来判断一下：第一是看溴酚蓝是否跑走了，如果跑走了，应该电泳缓冲液就没有问题；第二是加大一下上样量，有时候酶切过后的条带比未酶切的条带要弱（我也碰到这样的问题，不清楚为什么 ...

跑胶的时候我的酶切产物全部加进去了，共30ul。30ul的酶切体系中，DNA片段用了20ul的，量应该够大了吧。质粒用了5ul的，体系是20ul，也是全部上样了的，可是就是什么都没有
另外，用酶切产物做pcr是怎么个意思？如果是pcr没条带就是降解了？
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11楼2012-09-20 16:06:28
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-21 14:17:29
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:58:12
这个问题我也碰到过，主要我的原因是质粒的浓度太低，然后酶切时间又比较长，我过夜酶切的，楼主可以试试加大质粒浓度，然后酶切时间短一点，如果只是验证的话，没有必要完全切开，有目的条带就可以.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
12楼2012-09-20 16:35:07
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尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:43:43
引用回帖:
8楼: Originally posted by 静音0108 at 2012-09-20 15:56:10
marker有的，EB加了...

你这属于灵异事件了，要不在实验室烧烧香啥的。。。
开玩笑，你说DNA片段条带比较淡，那加大一点量试试吧。。。
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高山仰止，景行行止，虽不能至，心向往之。
13楼2012-09-20 16:50:12
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黑色de星期⑧

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:43:53
是不是酶或者buffer你用错了，再仔细看看酶切位点，上面几楼所说的都是主要原因，如果没有错了，那就不知道了
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14楼2012-09-20 19:53:36
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changyi_23

金虫 (小有名气)
酶切时间不会嫌长吧 我们都酶切过夜的呢 结果呀还好~
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15楼2012-09-21 08:47:40
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李蓝莓

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我要遇到了这个问题，切了几次后都是没带 郁闷了，
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16楼2013-01-15 23:06:26
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崔t-o-p

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得酶切时间长，把质粒降解了不太可能，酶切之前是纯质粒浓度肯定客观， 酶切加了那么多体系，相当于稀释了你的质粒浓度。再上样电泳，看不清也是可能的。。我之前也是电泳鉴定没有看到条带，愣是连上了。。祝你好运。。
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17楼2013-03-19 10:09:40
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 李蓝莓 at 2013-01-15 23:06:26
我要遇到了这个问题，切了几次后都是没带 郁闷了，

我现在也遇到这个问题，不知道这位同学你解决这个问题了吗？？我是一直都受这个困扰啊
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18楼2013-06-24 22:05:05
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
楼主你的这个问题不知道解决了没有，我一连3周都是这样，怎么回事？？
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19楼2013-06-24 22:07:36
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

量可能太少了，，胶回收有一定的效率，，最好加洗脱液的量应该不少。相应的浓度就低了。上的样可能没跑出来。，。测下浓度再加相依的量跑试试。。祝好
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20楼2013-06-25 09:29:52
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