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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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静音0108

银虫 (初入文坛)

[求助] 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事?

众位虫子们  帮帮忙啊  谁遇到过这种状况  
质粒和DNA片段做双酶切后  跑胶后什么都没有  一片空白。用于酶切的质粒和片段在酶切前跑胶是有条带的 ,为何切后什么都没了?我37℃酶切了7小时,即使是时间过长了 ,也应该有弥散的吧?
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酶切专家

金虫 (小有名气)

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静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:00
你电泳时有没有酶切的质粒或DNA对照吗?不会是没加EB吧?
2楼2012-09-18 21:57:10
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尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

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感谢参与,应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:13
没带MARKER?完全空白估计是忘记加EB了吧
高山仰止,景行行止,虽不能至,心向往之。
3楼2012-09-18 23:13:02
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:27
你用MARKER,酶切前后产物,一起跑一下。7个小时感觉时间太长了,酶的活性很高,3个小时感觉就可以了
4楼2012-09-18 23:48:57
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bclz

铁杆木虫 (正式写手)

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★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:00:58
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:36
质粒和DNA的质量怎样?如果没问题的话,那就是胶或者跑电泳的问题,点样漏了或者是缓冲液用的时间太久了,或者就像楼上所说,没加EB或者EB失效了。另外,酶切7小时是有点长,我们一般三小时就OK了。
5楼2012-09-19 10:39:26
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skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-21 14:17:13
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:43
个人感觉楼主可以从以下几个方面来判断一下:第一是看溴酚蓝是否跑走了,如果跑走了,应该电泳缓冲液就没有问题;第二是加大一下上样量,有时候酶切过后的条带比未酶切的条带要弱(我也碰到这样的问题,不清楚为什么);第三是如楼上所说,点上未经酶切的质粒和片段作为对照。如果还是跑不出来,建议楼主用自己的引物以酶切产物为模板做下PCR,看是否是因为片段降解的问题。希望能帮到你!
努力!
6楼2012-09-19 16:11:48
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静音0108

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-09-18 21:57:10
你电泳时有没有酶切的质粒或DNA对照吗?不会是没加EB吧?

同一块胶上另一半跑的pcr产物都有带 ,就只是酶切的没有条带
7楼2012-09-20 15:55:38
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静音0108

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 尚慕寒 at 2012-09-18 23:13:02
没带MARKER?完全空白估计是忘记加EB了吧

marker有的,EB加了
8楼2012-09-20 15:56:10
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静音0108

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-18 23:48:57
你用MARKER,酶切前后产物,一起跑一下。7个小时感觉时间太长了,酶的活性很高,3个小时感觉就可以了

我第二天切了两个小时,依然什么也没有,主要是我那是个混合酶切位点,时间短了 ,怕是切不开
9楼2012-09-20 15:57:22
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静音0108

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by bclz at 2012-09-19 10:39:26
质粒和DNA的质量怎样?如果没问题的话,那就是胶或者跑电泳的问题,点样漏了或者是缓冲液用的时间太久了,或者就像楼上所说,没加EB或者EB失效了。另外,酶切7小时是有点长,我们一般三小时就OK了。

质粒和DNA的片段都取2ul上过样了的,有条带,DNA片段的虽然较浅,看还是能看清的。胶上另一半跑的其它东西有条带,一连5个孔都漏了的可能性也不大吧 毕竟同一块胶上另一半的没有漏。
10楼2012-09-20 16:00:45
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