应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？
201/2返回列表12下一页
查看: 3613  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

静音0108

银虫 (初入文坛)

[求助] 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？

众位虫子们  帮帮忙啊  谁遇到过这种状况  
质粒和DNA片段做双酶切后  跑胶后什么都没有  一片空白。用于酶切的质粒和片段在酶切前跑胶是有条带的 ，为何切后什么都没了？我37℃酶切了7小时，即使是时间过长了 ，也应该有弥散的吧？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-18 21:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:00
你电泳时有没有酶切的质粒或DNA对照吗？不会是没加EB吧？
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-18 21:57:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:13
没带MARKER？完全空白估计是忘记加EB了吧
赞一下 回复此楼
高山仰止，景行行止，虽不能至，心向往之。
3楼2012-09-18 23:13:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:27
你用MARKER，酶切前后产物，一起跑一下。7个小时感觉时间太长了，酶的活性很高，3个小时感觉就可以了
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-18 23:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bclz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:00:58
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:36
质粒和DNA的质量怎样？如果没问题的话，那就是胶或者跑电泳的问题，点样漏了或者是缓冲液用的时间太久了，或者就像楼上所说，没加EB或者EB失效了。另外，酶切7小时是有点长，我们一般三小时就OK了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-19 10:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-21 14:17:13
静音0108: 金币+1 2012-11-10 18:42:43
个人感觉楼主可以从以下几个方面来判断一下：第一是看溴酚蓝是否跑走了，如果跑走了，应该电泳缓冲液就没有问题；第二是加大一下上样量，有时候酶切过后的条带比未酶切的条带要弱（我也碰到这样的问题，不清楚为什么）；第三是如楼上所说，点上未经酶切的质粒和片段作为对照。如果还是跑不出来，建议楼主用自己的引物以酶切产物为模板做下PCR，看是否是因为片段降解的问题。希望能帮到你！
赞一下 回复此楼
努力！
6楼2012-09-19 16:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-09-18 21:57:10
你电泳时有没有酶切的质粒或DNA对照吗？不会是没加EB吧？

同一块胶上另一半跑的pcr产物都有带 ，就只是酶切的没有条带
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-20 15:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 尚慕寒 at 2012-09-18 23:13:02
没带MARKER？完全空白估计是忘记加EB了吧

marker有的，EB加了
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-20 15:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-18 23:48:57
你用MARKER，酶切前后产物，一起跑一下。7个小时感觉时间太长了，酶的活性很高，3个小时感觉就可以了

我第二天切了两个小时，依然什么也没有，主要是我那是个混合酶切位点，时间短了 ，怕是切不开
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-20 15:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静音0108

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bclz at 2012-09-19 10:39:26
质粒和DNA的质量怎样？如果没问题的话，那就是胶或者跑电泳的问题，点样漏了或者是缓冲液用的时间太久了，或者就像楼上所说，没加EB或者EB失效了。另外，酶切7小时是有点长，我们一般三小时就OK了。

质粒和DNA的片段都取2ul上过样了的，有条带，DNA片段的虽然较浅，看还是能看清的。胶上另一半跑的其它东西有条带，一连5个孔都漏了的可能性也不大吧 毕竟同一块胶上另一半的没有漏。
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-20 16:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静音0108 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:02 by YHiw1gou1Eda
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:51 by YHiw1gou1Eda
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:18 by YHiw1gou1Eda
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 3/150 2026-11-10 01:40 by FChKX8meu1ds
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭