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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物酶切后电泳跑成这样 费解啊！！！
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dan62

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-25 09:15:10
可能是电压比较大
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21楼2012-12-24 20:24:35
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cool940

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忘忧草_: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-25 09:15:21
看你分子挺小的可以考虑用1XTAE试一下，此外，你的制胶肯定是有问题的，建议微波炉加热两次，第一次加热2分钟后摇匀，再重复一次；3%的胶有点浓了，试一下1~2%；每个lane都用buffer补平，这样胶不会跑歪；最后一点，楼主也太浪费了，ladder很贵的，十个lane的我一般都点5ul然后buffer补平。祝你实验顺利！
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22楼2012-12-24 21:21:54
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森林有木

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
忘忧草_: 金币+3, ★有帮助 2012-12-25 09:18:03
我以前的酶切也是会跑歪的，是里面杂质的问题
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笑笑别人 笑笑自己
23楼2012-12-24 21:43:31
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by cool940 at 2012-12-24 21:21:54
看你分子挺小的可以考虑用1XTAE试一下，此外，你的制胶肯定是有问题的，建议微波炉加热两次，第一次加热2分钟后摇匀，再重复一次；3%的胶有点浓了，试一下1~2%；每个lane都用buffer补平，这样胶不会跑歪；最后一点， ...

由于目的片段大小只有175作用 所以用了3%的胶 用1~2%的分不开吧
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不将就
24楼2012-12-25 09:17:19
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 森林有木 at 2012-12-24 21:43:31
我以前的酶切也是会跑歪的，是里面杂质的问题

杂质的问题 那做好该如何解决呢
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不将就
25楼2012-12-25 09:17:55
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-25 14:34:44
妹子不好意思，看到这图我不厚道的笑了，好萌的图
话说，你可以看看是不是点样的问题，点样不均匀有时候也会这样子，然后就是配胶，重新配胶一块，最后可能是电泳槽电压不稳定的问题，局部电压比较小？
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
26楼2012-12-25 14:10:01
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by Marado at 2012-12-25 14:10:01
妹子不好意思，看到这图我不厚道的笑了，好萌的图
话说，你可以看看是不是点样的问题，点样不均匀有时候也会这样子，然后就是配胶，重新配胶一块，最后可能是电泳槽电压不稳定的问题，局部电压比较小？

好吧 哈哈
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不将就
27楼2012-12-25 14:34:57
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忘忧草_: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-25 15:35:57
应该是样品的离子强度不统一引起。请你检查一下，不同酶的buffer ion conc. 中间的离子过高！
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28楼2012-12-25 14:45:28
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MagicWoods

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-25 15:36:14
三种可能：
1、胶不均匀，导致条带跑的走样了
2、电泳过程中电压不稳定，考虑下是否换个电源跑跑看
3、跑电泳时候电泳缓冲液是否盖过了胶面，还有就是跑电泳时候，是否在胶的周围存在较多的气泡！
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29楼2012-12-25 15:17:35
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xiting0208

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个问题我以前也出现过，酶切产物跑胶要用TAE来做胶，用TAE的缓冲液跑胶，然后就不会出现这个问题了，你试试
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努力却总失败的大烧杯
30楼2015-01-04 10:07:52
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