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忘忧草_

木虫 (正式写手)

[求助] pcr产物酶切后电泳跑成这样 费解啊!!!已有1人参与

pcr产物直接酶切(PdmI),然后用1XTBE缓冲液,3%琼脂糖凝胶电泳60V跑了一个小时,结果出先了诡异的条带,酶切部分条带变成了弧形,特别是和ladder接着的地方,为了排除其他影响,特意点了很多ladder,发现ladder都没问题,郁闷啊,求各位大侠给看看怎么回事啊!!!

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不将就
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

顶!!!!!!!!!!!1
2楼2012-12-19 11:24:00
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2012-12-19 11:35:20
MARKER有部分也歪了

产物没有问题,应该是你电泳条件不好。1,缓冲液没有把胶掩盖住;2,电极丝歪了;3,胶配的不好,冷却过头了

缓冲液都盖住了
电极丝不确定 我试了个电泳槽 也出现类似的情况 但是如果只跑pcr产物就没事 难道是酶切体系里面的一些物质在跑电泳时和胶发生了反应
而且这个图也只有酶切部分有问题 ladder都没问题啊
不将就
4楼2012-12-19 11:57:37
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

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6楼: Originally posted by btx362237729 at 2012-12-19 16:29:03
我觉得很可能是电极丝歪了 哈哈

这个我师弟换了TAE缓冲液 1%的胶 跑1000多的PCR片段没问题啊
不将就
9楼2012-12-19 18:53:46
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-12-19 16:42:42
兩個可能性吧,一個是膠有問題,不均勻;另一個是你的樣品里有社麼讓樣品變的粘了?

我也猜测是不是酶切体系的问题 体系里面有什么让胶在电泳时发生了变化 我的酶切体系是
pcr产物5 ul
酶       1 ul
buffer  1 ul
水       3 ul
不将就
10楼2012-12-19 18:56:21
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
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15楼: Originally posted by Eva2009 at 2012-12-22 15:41:11
酶切产物电泳经常会出现的情况,受离子含量的影响,导致电泳条带弯曲

那这样的情况怎么克服后者避免呢?
不将就
18楼2012-12-23 12:45:14
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

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22楼: Originally posted by cool940 at 2012-12-24 21:21:54
看你分子挺小的可以考虑用1XTAE试一下,此外,你的制胶肯定是有问题的,建议微波炉加热两次,第一次加热2分钟后摇匀,再重复一次;3%的胶有点浓了,试一下1~2%;每个lane都用buffer补平,这样胶不会跑歪;最后一点, ...

由于目的片段大小只有175作用 所以用了3%的胶 用1~2%的分不开吧
不将就
24楼2012-12-25 09:17:19
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

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23楼: Originally posted by 森林有木 at 2012-12-24 21:43:31
我以前的酶切也是会跑歪的,是里面杂质的问题

杂质的问题 那做好该如何解决呢
不将就
25楼2012-12-25 09:17:55
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

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26楼: Originally posted by Marado at 2012-12-25 14:10:01
妹子不好意思,看到这图我不厚道的笑了,好萌的图
话说,你可以看看是不是点样的问题,点样不均匀有时候也会这样子,然后就是配胶,重新配胶一块,最后可能是电泳槽电压不稳定的问题,局部电压比较小?

好吧 哈哈
不将就
27楼2012-12-25 14:34:57
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