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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR loading buffer的问题
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duke188

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR loading buffer的问题 已有2人参与

“10Xloading buffer中多了一样SDS，它会使酶类如taq酶变性，以PCR产物为例，在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一条带没有什么区别（大概1000bp左右）。”这句话啥意思啊。
       我跑DNA电泳，一个月以来都失败，条带弥散，是不是和我用的是10Xloading buffer有关啊？
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1楼 2013-10-08 21:13:34
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-09 09:10:04
跑PCR产物不用10Xloading buffer，6Xloading buffer就可以，10Xloading buffer的一般用于酶切回收跑电泳
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2楼2013-10-08 21:34:47
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-10-08 21:34:47
跑PCR产物不用10Xloading buffer，6Xloading buffer就可以，10Xloading buffer的一般用于酶切回收跑电泳

10Xloading buffer的一般用于酶切回收跑电泳
是啥意思啊
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3楼2013-10-08 21:38:47
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
就是酶切结束之后加的是10Xloading buffer
而不6Xloading buffer
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4楼2013-10-08 21:48:38
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-10-08 21:48:38
就是酶切结束之后加的是10Xloading buffer
而不6Xloading buffer

那我跑DNA电泳出现条带弥散的现象，与我使用10Xloading buffer有关不
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5楼2013-10-08 22:11:13
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-09 09:10:10
反正我跑琼脂胶是从来都不在loading buffer里加SDS的,我的理解是SDS可以让蛋白变性带负电荷,这样可以和DNA一样在胶上移动.
一般情况下,蛋白都是停在加样孔,有时候加样孔很亮就是这个原因
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2013-10-08 22:18:13
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
无关
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7楼2013-10-09 08:34:38
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-08 22:18:13
反正我跑琼脂胶是从来都不在loading buffer里加SDS的,我的理解是SDS可以让蛋白变性带负电荷,这样可以和DNA一样在胶上移动.
一般情况下,蛋白都是停在加样孔,有时候加样孔很亮就是这个原因

进一步加深了我的理解
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8楼2013-10-09 21:31:43
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-10-09 08:34:38
无关

貌似我有点顿悟了
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9楼2013-10-09 21:31:56
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