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小闲丫丫

新虫 (初入文坛)

[交流] RNA电泳和PCR产物电泳中加的buffer是一样的吗 已有8人参与

RNA或DNA提取后电泳检测时,点样时要加什么试剂?PCR完成后,电泳点样时加的是什么?作用是什么?
我是初学,一点基础都没有,求各位指教,感激
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)


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加入BUFFER,又称上样缓冲液,里面有示踪染料,你能看到样品跑的情况,还有甘油,与产物混合后能够沉入胶空。DNA、RNA,都是一样的。
2楼2012-11-20 22:24:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
RNA loading buffer需要用DEPC水配置
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-11-21 01:55:41
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jl860822

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用一样的,RNA电泳150v跑15-20min,尽量缩短时间,不会降解的
4楼2012-11-21 08:49:46
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 欢迎分享 2012-11-21 17:26:43
个人建议,仅供参考!
加的是loading buffer,根据加的不同浓度的,最终稀释成1x即可;
作用1:buffer里面含有的甘油、蔗糖与DNA/RNA混合后可以可以增大DNA/RNA密度,使易于上样,样品不易扩散;
作用2:buffer里面含有溴酚蓝,作为前沿指示剂,在不同浓度的胶里面,这条蓝色条带,所代表的DNA/RNA大小不同,我们可以根据他所在的位置确定目的条带的大概位置,并及时终止电泳。
5楼2012-11-21 09:10:33
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
补充一下楼上,有些上样buffer里面含有两种指示剂:二甲基苯青FF以及溴酚蓝
6楼2012-11-21 14:43:55
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)


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买的酶会附送loading buffer,一般是6×的
7楼2012-11-22 22:33:27
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zhengli123

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用的缓冲液都是一样的,我们一般用TAE,只不过RNA最好用刚换的缓冲液,或者用DEPC配置的
8楼2012-11-23 09:33:11
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小闲丫丫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-11-21 09:10:33
个人建议,仅供参考!
加的是loading buffer,根据加的不同浓度的,最终稀释成1x即可;
作用1:buffer里面含有的甘油、蔗糖与DNA/RNA混合后可以可以增大DNA/RNA密度,使易于上样,样品不易扩散;
作用2:buffer里 ...

非常感谢
9楼2012-11-23 10:17:58
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小闲丫丫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2012-11-20 22:24:32
加入BUFFER,又称上样缓冲液,里面有示踪染料,你能看到样品跑的情况,还有甘油,与产物混合后能够沉入胶空。DNA、RNA,都是一样的。

10楼2012-11-23 10:18:24
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