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关于PCR中测RNA完整性的琼脂糖变性凝胶电泳实验 已有4人参与
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| 最近要做QRTPCR，RNA提取后想测下RNA完整性，RNA琼脂糖变性凝胶电泳实验的方案搜索了很多用TAE TBE MOPS缓冲液的都有。筒子们谁做过，能提供给一份详细点的试验流程的，万分感谢啊 |
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gaoyang636
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【答案】应助回帖
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lanlvmaomao(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 22:02:01
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实验步骤： (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 (2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。 (3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。 试剂： (1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。 (2)上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。 (3)甲醛。 (4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。 |
7楼2014-02-27 16:14:09
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10楼2014-02-28 09:19:22
