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1楼2013-10-27 11:25:39

dongjingjia

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主要是后面几个条带不是很清楚，请问一下大家怎么解决

2楼2013-10-27 11:28:38

867575969

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-27 17:44:23

你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。

有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！

3楼2013-10-27 11:36:36

dongjingjia

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3楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。

不是有6个样本，只是第离maker最近的条带没有跑出来，前三个泳道是一个gene，中间空了一个，后三个泳道又是另一个基因，用同一台PCR，P的，后三个不是太好，所以不知道是不是改改体系，或者其他的

4楼2013-10-27 11:43:18

867575969

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-28 00:53:18

改下体系引物TM值，也可能是水稻cDNA纯度问题。

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5楼2013-10-27 12:24:45

grape_vine

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3楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。

后三个要是再增加退货温度,我估计扩增量应该不会再增加很多了吧,感觉换个引物是不是更靠普

6楼2013-10-27 21:22:48

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6楼: Originally posted by grape_vine at 2013-10-27 21:22:48
后三个要是再增加退货温度,我估计扩增量应该不会再增加很多了吧,感觉换个引物是不是更靠普...

如果有其他引物，换的试下当然更好

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7楼2013-10-27 21:33:49

dongjingjia

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7楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 21:33:49
如果有其他引物，换的试下当然更好...

因为引物都是老师设计好的，我感觉前三个可以p出来，那么引物应该没什么问题吧

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8楼2013-10-27 23:21:52

867575969

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8楼: Originally posted by dongjingjia at 2013-10-27 23:21:52
因为引物都是老师设计好的，我感觉前三个可以p出来，那么引物应该没什么问题吧
...

我以前用12个引物跑过52个不同样本，其中每一种引物对不同的样本p出来的都不尽相同，另外，问下lz你用的是一对特异性引物，是做基因克隆？

有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！

9楼2013-10-28 10:32:50

dongjingjia

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9楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-28 10:32:50
我以前用12个引物跑过52个不同样本，其中每一种引物对不同的样本p出来的都不尽相同，另外，问下lz你用的是一对特异性引物，是做基因克隆？...

就是做基因克隆

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10楼2013-10-28 22:26:43