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bunntly

木虫 (正式写手)

[求助] DNA电泳图分析

本人第一次提的醋酸菌基因，电泳图的第七条带为200bp的maker 可能胶有些问题跑出来的maker也不清楚。其他的条带也不好 ，求指教分析图中存在的问题
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    • 2013-04-13 12:55:25, 57.94 K

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1楼2013-04-13 12:53:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bunntly(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-14 15:30:00
DNA提得还可以吧，主要是胶或者电泳的问题。融胶的时候一定要均一，电泳时缓冲液没过胶面。
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2楼2013-04-14 01:04:46
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-14 01:04:46
DNA提得还可以吧，主要是胶或者电泳的问题。融胶的时候一定要均一，电泳时缓冲液没过胶面。

DNA为什么拖带这么严重呢？我都不知道哪个应该是DNA条带
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3楼2013-04-14 09:40:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
bunntly(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-14 15:30:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by bunntly at 2013-04-14 09:40:53
DNA为什么拖带这么严重呢？我都不知道哪个应该是DNA条带...

上面的亮带是基因组DNA，一般提出来的基因组DNA在几十kb。下面拖尾的有可能是未完全降解的RNA。点样孔发亮是因为样品里有核酸蛋白复合体。
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4楼2013-04-14 10:52:33
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782478106

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bunntly(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-14 15:30:21
最上面的是DNA亮带，下面的可能是RNA，中间的拖带可能是杂质蛋白，如果需要纯的DNA，加入rna 裂解酶
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时刻都要努力，为了下一秒
5楼2013-04-14 15:09:28
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ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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bunntly: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-14 23:11:39
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:39:22
话说这个胶跑的时间有点长了貌似 而且上Maker的时候有没有完全沉下去如果是有一部分飘在上样孔里就可能出现这样情况。
还有胶是不是浓度不均一并且对于基因组的电泳可以尝试提高琼脂糖的浓度这样条带会好看一点有拖尾什么的是正常的 除非你基因组浓度非常高可以减少上样量这样杂质的含量就不会那么明显了
其他的问题上面几楼都分析过了
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6楼2013-04-14 19:38:13
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ptzhyding06 at 2013-04-14 19:38:13
话说这个胶跑的时间有点长了貌似 而且上Maker的时候有没有完全沉下去如果是有一部分飘在上样孔里就可能出现这样情况。
还有胶是不是浓度不均一并且对于基因组的电泳可以尝试提高琼脂糖的浓度这样条带会好看一点有拖 ...

还想问一下 跑胶时电压稳定与电流稳定有什么区别 应该选哪一个
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7楼2013-04-14 23:15:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
bunntly(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-29 14:39:35
引用回帖:
7楼: Originally posted by bunntly at 2013-04-14 23:15:24
还想问一下 跑胶时电压稳定与电流稳定有什么区别 应该选哪一个...

稳压和稳流在电泳中都可以用的。一般常用的是稳压跑。
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8楼2013-04-15 00:09:03
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Anita小毛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:39:44
我觉得拖尾太严重了，是不是没有加RNaas去除RNA，凝胶可能配的不好，建议从新配一次。
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9楼2013-04-15 21:46:07
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Anita小毛 at 2013-04-15 21:46:07
我觉得拖尾太严重了，是不是没有加RNaas去除RNA，凝胶可能配的不好，建议从新配一次。

加了RNase了 是不是加的量太少了吧 胶可能有问题 还有就是TAE溶液可能配得太久了  是不是最好现配 还是放一段影像也不大呢
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10楼2013-04-16 08:16:51
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