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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 核酸电泳图求分析
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 核酸电泳图求分析

各位虫友，我从昨天开始做PCR及核酸电泳，电泳图出现问题，缓冲液是TAE，新稀释的，marker为4500bp，marker拖尾严重，溶胶时间1min左右，待沸腾后每隔约5秒拿出来摇匀一下，染料用的gelred，电压90v，电泳50min，请各位帮忙分析原因。
核酸电泳图求分析
1.jpg
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1楼 2013-07-04 16:43:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-07-05 15:03:22
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢提供意见 2013-07-06 09:01:07
胶是否熔好不能以时间判断，应该通过目测完全没有颗粒物才行。很多时候沸腾后还是有不熔的颗粒，不是趁热摇就可以完全熔掉的。
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3楼2013-07-05 00:51:56
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-06 02:04:02
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢提供意见 2013-07-06 09:02:36
第一可能是胶浓度问题，胶浓度过大不利于大分子DNA的移动，建议配置1%左右的胶，同时在加入TAX后可适当加入3-4ml的水，减少因沸腾蒸发的水。第二可以换个大点的电压试试，我一般是150V跑20min。第三就是你可以把胶从微波炉里拿出来之后确定都熔了就可以加燃料，然后倒在制胶板上冷却就可以，不用冷却一会再加。
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14楼2013-07-06 00:58:13
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普通回帖

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 22:36:15
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢提供帮助 2013-07-06 09:00:48
1，胶的浓度，，2，marker有无污染，，有些dna酶污染。可以影响条带
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2楼2013-07-04 21:47:21
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:47:21
1，胶的浓度，，2，marker有无污染，，有些dna酶污染。可以影响条带

marker是新的，应该没有污染吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-07-05 07:53:27
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-05 00:51:56
胶是否熔好不能以时间判断，应该通过目测完全没有颗粒物才行。很多时候沸腾后还是有不熔的颗粒，不是趁热摇就可以完全熔掉的。

胶每次都是目测没有颗粒，完全透明后再降温的，请问如何熔胶才能没有可颗粒呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-07-05 07:55:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
windycui: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回复 2013-07-06 09:04:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by windycui at 2013-07-05 07:55:26
胶每次都是目测没有颗粒，完全透明后再降温的，请问如何熔胶才能没有可颗粒呢？
...

就是在微波炉里热，然后对着光摇晃，看是否有颗粒。
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6楼2013-07-05 08:30:58
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-05 08:30:58
就是在微波炉里热，然后对着光摇晃，看是否有颗粒。...

是的，我也是这样做的，而且我熔的没有颗粒，为了防止万一，我都是看着没有颗粒了再熔5-10s钟，结果还是这样
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7楼2013-07-05 11:12:19
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢提出意见 2013-07-06 09:01:34
Marker是不是发生了断裂或者降解。凝胶浓度是不是不均匀，可能是凝胶的冷却过程处理的不好。
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8楼2013-07-05 11:31:09
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-05 11:31:09
Marker是不是发生了断裂或者降解。凝胶浓度是不是不均匀，可能是凝胶的冷却过程处理的不好。

请问凝胶的冷却过程如何处理呢？胶是从微波炉里拿出来的，微波炉屋没有空调，凝胶屋空调大概25度左右，冷却一段时间，至手可以忍受的温度后加染料，然后倒入电泳槽子，有问题吗？
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9楼2013-07-05 11:37:16
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半生一梦

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-07-06 09:01:54
1949stone: 这个一般不会啦 2013-07-08 08:09:23
会不会是电泳仪出现故障啊 看你电泳时间是50min 我们一般电泳50V 20min左右呢
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10楼2013-07-05 15:07:38
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