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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白质sds-page电泳图分析
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清风散人

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质sds-page电泳图分析

样品是未知蛋白（显然marker不合适），四张图中大片蓝色部位都是点的同一个样，可以说明那就是目的条带吗？还有，这些图都不理想，分别有什么问题？

这是四次电泳的图片，所有的样品都是从微生物发酵液中硫酸铵沉淀法提取的目的蛋白
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1楼2012-08-01 19:37:10
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回帖置顶 ( 共有2个 )

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 回帖置顶 2012-08-06 07:15:25
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 这个很到位 2012-08-06 07:15:39
引用回帖:
9楼: Originally posted by 清风散人 at 2012-08-05 21:11:32
四个图中大片蓝色都说明这个问题？谢~...

是的，一个蛋白质上样量再大，它的边缘也是齐整的，要是不齐整，那就肯定是有多个迁移率近似的蛋白质，你的斑点我分析如下，我在疑似有蛋白质条带的地方都标上箭头。另外传上我跑的电泳图，有一个蛋白质量较大，但是边缘齐整，注意比较和你的电泳条带的差别（第一个泳道是纯酶，其余泳道是含有该酶的各种样品，你可以根据纯酶的位置来确定这些样品中该酶的条带）。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2012-08-06 00:59:42
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清风散人

铁虫 (小有名气)
清风散人: 回帖置顶 2012-08-07 09:18:07
引用回帖:
19楼: Originally posted by 清风散人 at 2012-08-06 18:55:01
多谢多谢。我的样确实是有很多蛋白。这是最新的图，中间三个泳道是我提的样品，最右边那个师兄提的，明显我的样很不纯。但是marker缩到一起是什么问题呢？谢~...

这是图

中间三个是我提的样，右边是师兄以前提的还剩一点点的样
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20楼2012-08-06 19:07:26
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清风散人

铁虫 (小有名气)
非常好的帖子，正在看，感谢！
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2楼2012-08-01 20:05:25
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
清风散人: 金币+1, ★★★很有帮助, 我的分离胶都超过三分之一了。缓冲液要是用新配的，电泳就特别快，只要四十多分钟，有点不正常。目的蛋白是小分子的，但是那个位置并不完全相同，所以不太确定。 2012-08-05 21:15:42
胶没跑好，不是很清晰，换新的电泳缓冲液，分离胶不能太短，大约应该占总胶的1/3。
Marker应该换个，现在最小条带的Marker有1kDa，不过需要Tricine-SDS-PAGE来跑，应该能满足你的要求。
那么小的分子，如果是特意提取的，你那位置基本上都是你的目的蛋白，要确认必须做个Western Bolting鉴定下。
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8楼2012-08-04 00:41:54
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
14楼: Originally posted by zzqbaidu at 2012-08-06 10:10:08
你的电泳图用啥相机拍的啊   这么清楚...

就是这东西
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16楼2012-08-06 15:04:23
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普通回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的目的蛋白是否是分子量很小？有点像样品被降解的感觉。操作过程中加蛋白酶抑制剂了吗？
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3楼2012-08-01 20:57:09
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清风散人

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-01 20:57:09
你的目的蛋白是否是分子量很小？有点像样品被降解的感觉。操作过程中加蛋白酶抑制剂了吗？

是的，小分子蛋白，比marker最小的还小，所以应该在最下面。但是一直不确定是哪条：比如图2中marker带正常，旁边那两片深蓝色位置还不一样；图4也不知道marker左边的深色带跟右边的较规则的淡带是不是同一组分
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4楼2012-08-01 21:26:21
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
虽然看着像是一个蓝色点，但是边缘不平整，肯定是多个蛋白质。
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5楼2012-08-01 23:47:32
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)
没跑开啊  换个浓度试试
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帮忙点下我的网站http://www.yayadan.com 欢迎光临！
6楼2012-08-02 13:40:45
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议胶浓度配高点，然后Marker的话，加一个超低分子量Marker试试
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7楼2012-08-02 22:45:03
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清风散人

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-01 23:47:32
虽然看着像是一个蓝色点，但是边缘不平整，肯定是多个蛋白质。

四个图中大片蓝色都说明这个问题？谢~
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9楼2012-08-05 21:11:32
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清风散人

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zzqbaidu at 2012-08-02 13:40:45
没跑开啊  换个浓度试试

首先感谢~你说的是不是跟楼上的一个问题呢？是指大片蓝色没分开所以要调整浓度吗？但是我师兄用同样的浓度跑出来了的
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10楼2012-08-05 21:13:02
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