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rivergf

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家来看看我的SDS-PAGE图，为什么有些主带分成了好几条小带??? 已有11人参与

大家来看看我的SDS-PAGE图，为什么有些主带分成了好几条小带???


我的实验内容大致是这样的：酵母菌培养----取样----离心，收集沉淀----洗涤----沉淀加入裂解液（裂解液包括CHAPS、硫脲、尿素、DTT）----液氮研磨----离心，取上清做电泳！

为什么会出现这样的条带啊？

我的Marker跑的很好，说明胶应该没有问题，那就应该是我蛋白质样液出现了问题！到底是什么问题？有谁以前见过这种情况吗？

我先说声谢谢了！！！
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生活、目标、信仰、改变。。。
1楼 2010-04-25 19:46:41
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rivergf

铜虫 (小有名气)
补充一下 大家应该也注意到了 Marker 旁边有条带也跑得不错，最右边的一条带也没有分裂。

到底是什么原因导致出现这样的图啊？！！！
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生活、目标、信仰、改变。。。
2楼2010-04-25 19:51:04
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
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胶没灌好
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3楼2010-04-25 19:52:24
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studentg

金虫 (小有名气)

胶的问题

★
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可以重做一下。
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道法自然，探其精妙。
4楼2010-04-25 20:40:10
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helloclare

木虫 (正式写手)
★
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每条泳道的样品都相同吗？怎么看起来条带都不一样啊
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5楼2010-04-25 21:47:11
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hui_student

银虫 (小有名气)
★
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我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了它下面的蛋白的电泳途径，而形成了楼主照片中的条带。我后来加长了样本离心转速，12000rpm，5min ，条带就好些了，没出现原来的情况了。
你可以试试，如果排除了这个原因，你再看看是不是像楼上说的胶做的不成型的原因，实验不顺利的原因很多种，需要慢慢分析与排除，祝好运！
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一路前行！
6楼2010-04-25 22:31:32
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sl19821129

铁杆木虫 (正式写手)
★
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胶没做好，重新按照条件做胶
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7楼2010-04-25 23:05:50
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
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胶没有混匀，样品中颗粒物，盐离子浓度过高
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8楼2010-04-26 05:11:16
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
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是胶的问题，没做好
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9楼2010-04-26 08:52:40
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asd123xukun

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

请问，是样品加了处理液后再离心，还是离心后再加处理液呢？谢谢！
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10楼2010-04-26 13:16:23
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