24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2138  |  回复: 16

度百

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意5楼的观点,可以将样品离心后在试试。
我在故我思!
11楼2010-04-26 15:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hui_student

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 00:32
你说的处理液是什么意思?是上扬缓冲液么?
可能做的标本不一样,我做的细胞裂解,提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞,离心取上清(含目的蛋白),再加等体积2×上样缓冲液,煮沸5min,12000rpm,吸取上层做PAGE.
一路前行!
12楼2010-04-26 21:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-26 21:13:27:
你说的处理液是什么意思?是上扬缓冲液么?
可能做的标本不一样,我做的细胞裂解,提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞,离心取上清(含目的蛋白),再加等体积2×上样缓冲液,煮沸5min,12000rpm,吸取上层做PAGE.

我是提取细胞全蛋白,既要胞内蛋白,也要膜蛋白。所以我的去污剂用的是CHAPS。

粗提取的蛋白质,取上清做SDS-PAGE。样液与loading buffer一起煮沸10min,瞬时离心吸取上层进行电泳!
生活、目标、信仰、改变。。。
13楼2010-04-26 22:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by helloclare at 2010-04-25 21:47:11:
每条泳道的样品都相同吗?怎么看起来条带都不一样啊

我用考马斯亮蓝法测定的蛋白质含量,但因为提取液中含有去污剂CHAPS,而CHAPS会和考马斯亮蓝竞争蛋白质结合位点,所以测定的蛋白质含量不准。

我上样时是按每孔的蛋白质质量相同,但似乎因为定量方法不准,导致有些条带不清晰!
生活、目标、信仰、改变。。。
14楼2010-04-26 22:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况,但是还没有这么厉害,只是中间出现一条带(就是把横行带分成了两部分)。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分,没有随着蛋白的移动而一起向下涌动,而是一直停留在加样孔中,阻止了 ...

我同意你的部分观点!
当我取出分装的蛋白质样液时,管底有一些晶体,我不知道是什么,可能是提取液(提取液成分:CHAPS、硫脲、尿素、DTT)中的某种物质吧,我是震荡让其溶解以后在上样,也许我应该去除这些晶体。

另外,既然有一个样液跑的比较好,而且正好是蛋白质浓度最高的那个泳道,所以我觉得很有可能我的蛋白质浓度还是太低了吧!!

谢谢你的回答!对我的分析很有帮助!!!

再次感谢!!!
生活、目标、信仰、改变。。。
15楼2010-04-26 23:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况,但是还没有这么厉害,只是中间出现一条带(就是把横行带分成了两部分)。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分,没有随着蛋白的移动而一起向下涌动,而是一直停留在加样孔中,阻止了 ...

对另外 刚才忘了说了 ,我觉得我的离心的不存在太大问题,我的离心条件是:12000g,4°C冷冻离心10min.
生活、目标、信仰、改变。。。
16楼2010-04-26 23:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyg7720349

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感觉是蛋白含有其他成分,移动速率不一样
望大家都各有所获!
17楼2010-04-27 20:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rivergf 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见