应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家来看看我的SDS-PAGE图，为什么有些主带分成了好几条小带???
172/2返回列表上一页12
查看: 2138  |  回复: 16
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

度百

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意5楼的观点，可以将样品离心后在试试。
赞一下(1人) 回复此楼
我在故我思！
11楼2010-04-26 15:13:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hui_student

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 00:32
你说的处理液是什么意思？是上扬缓冲液么？
可能做的标本不一样，我做的细胞裂解，提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞，离心取上清（含目的蛋白），再加等体积2×上样缓冲液，煮沸5min，12000rpm，吸取上层做PAGE.
赞一下(2人) 回复此楼
一路前行！
12楼2010-04-26 21:13:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-26 21:13:27:
你说的处理液是什么意思？是上扬缓冲液么？
可能做的标本不一样，我做的细胞裂解，提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞，离心取上清（含目的蛋白），再加等体积2×上样缓冲液，煮沸5min，12000rpm，吸取上层做PAGE.

我是提取细胞全蛋白，既要胞内蛋白，也要膜蛋白。所以我的去污剂用的是CHAPS。

粗提取的蛋白质，取上清做SDS-PAGE。样液与loading buffer一起煮沸10min，瞬时离心吸取上层进行电泳！
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
13楼2010-04-26 22:52:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by helloclare at 2010-04-25 21:47:11:
每条泳道的样品都相同吗？怎么看起来条带都不一样啊

我用考马斯亮蓝法测定的蛋白质含量，但因为提取液中含有去污剂CHAPS，而CHAPS会和考马斯亮蓝竞争蛋白质结合位点，所以测定的蛋白质含量不准。

我上样时是按每孔的蛋白质质量相同，但似乎因为定量方法不准，导致有些条带不清晰！
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
14楼2010-04-26 22:56:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

我同意你的部分观点！
当我取出分装的蛋白质样液时，管底有一些晶体，我不知道是什么，可能是提取液（提取液成分：CHAPS、硫脲、尿素、DTT）中的某种物质吧，我是震荡让其溶解以后在上样，也许我应该去除这些晶体。

另外，既然有一个样液跑的比较好，而且正好是蛋白质浓度最高的那个泳道，所以我觉得很有可能我的蛋白质浓度还是太低了吧！！

谢谢你的回答！对我的分析很有帮助！！！

再次感谢！！！
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
15楼2010-04-26 23:02:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

对另外 刚才忘了说了 ，我觉得我的离心的不存在太大问题，我的离心条件是：12000g，4°C冷冻离心10min.
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
16楼2010-04-26 23:08:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉是蛋白含有其他成分，移动速率不一样
赞一下(1人) 回复此楼
望大家都各有所获！
17楼2010-04-27 20:03:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rivergf 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭