应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家来看看我的SDS-PAGE图，为什么有些主带分成了好几条小带???
172/2返回列表上一页12
查看: 2839  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

度百

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意5楼的观点，可以将样品离心后在试试。
赞一下(1人) 回复此楼
我在故我思！
11楼2010-04-26 15:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hui_student

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 00:32
你说的处理液是什么意思？是上扬缓冲液么？
可能做的标本不一样，我做的细胞裂解，提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞，离心取上清（含目的蛋白），再加等体积2×上样缓冲液，煮沸5min，12000rpm，吸取上层做PAGE.
赞一下(2人) 回复此楼
一路前行！
12楼2010-04-26 21:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-26 21:13:27:
你说的处理液是什么意思？是上扬缓冲液么？
可能做的标本不一样，我做的细胞裂解，提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞，离心取上清（含目的蛋白），再加等体积2×上样缓冲液，煮沸5min，12000rpm，吸取上层做PAGE.

我是提取细胞全蛋白，既要胞内蛋白，也要膜蛋白。所以我的去污剂用的是CHAPS。

粗提取的蛋白质，取上清做SDS-PAGE。样液与loading buffer一起煮沸10min，瞬时离心吸取上层进行电泳！
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
13楼2010-04-26 22:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by helloclare at 2010-04-25 21:47:11:
每条泳道的样品都相同吗？怎么看起来条带都不一样啊

我用考马斯亮蓝法测定的蛋白质含量，但因为提取液中含有去污剂CHAPS，而CHAPS会和考马斯亮蓝竞争蛋白质结合位点，所以测定的蛋白质含量不准。

我上样时是按每孔的蛋白质质量相同，但似乎因为定量方法不准，导致有些条带不清晰！
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
14楼2010-04-26 22:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

我同意你的部分观点！
当我取出分装的蛋白质样液时，管底有一些晶体，我不知道是什么，可能是提取液（提取液成分：CHAPS、硫脲、尿素、DTT）中的某种物质吧，我是震荡让其溶解以后在上样，也许我应该去除这些晶体。

另外，既然有一个样液跑的比较好，而且正好是蛋白质浓度最高的那个泳道，所以我觉得很有可能我的蛋白质浓度还是太低了吧！！

谢谢你的回答！对我的分析很有帮助！！！

再次感谢！！！
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
15楼2010-04-26 23:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

对另外 刚才忘了说了 ，我觉得我的离心的不存在太大问题，我的离心条件是：12000g，4°C冷冻离心10min.
赞一下 回复此楼
生活、目标、信仰、改变。。。
16楼2010-04-26 23:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉是蛋白含有其他成分，移动速率不一样
赞一下(1人) 回复此楼
望大家都各有所获！
17楼2010-04-27 20:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rivergf 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭