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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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度百

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意5楼的观点，可以将样品离心后在试试。
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我在故我思！
11楼2010-04-26 15:13:22
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hui_student

银虫 (小有名气)
★ ★
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scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 00:32
你说的处理液是什么意思？是上扬缓冲液么？
可能做的标本不一样，我做的细胞裂解，提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞，离心取上清（含目的蛋白），再加等体积2×上样缓冲液，煮沸5min，12000rpm，吸取上层做PAGE.
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一路前行！
12楼2010-04-26 21:13:27
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rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-26 21:13:27:
你说的处理液是什么意思？是上扬缓冲液么？
可能做的标本不一样，我做的细胞裂解，提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞，离心取上清（含目的蛋白），再加等体积2×上样缓冲液，煮沸5min，12000rpm，吸取上层做PAGE.

我是提取细胞全蛋白，既要胞内蛋白，也要膜蛋白。所以我的去污剂用的是CHAPS。

粗提取的蛋白质，取上清做SDS-PAGE。样液与loading buffer一起煮沸10min，瞬时离心吸取上层进行电泳！
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生活、目标、信仰、改变。。。
13楼2010-04-26 22:52:44
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rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by helloclare at 2010-04-25 21:47:11:
每条泳道的样品都相同吗？怎么看起来条带都不一样啊

我用考马斯亮蓝法测定的蛋白质含量，但因为提取液中含有去污剂CHAPS，而CHAPS会和考马斯亮蓝竞争蛋白质结合位点，所以测定的蛋白质含量不准。

我上样时是按每孔的蛋白质质量相同，但似乎因为定量方法不准，导致有些条带不清晰！
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生活、目标、信仰、改变。。。
14楼2010-04-26 22:56:54
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rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

我同意你的部分观点！
当我取出分装的蛋白质样液时，管底有一些晶体，我不知道是什么，可能是提取液（提取液成分：CHAPS、硫脲、尿素、DTT）中的某种物质吧，我是震荡让其溶解以后在上样，也许我应该去除这些晶体。

另外，既然有一个样液跑的比较好，而且正好是蛋白质浓度最高的那个泳道，所以我觉得很有可能我的蛋白质浓度还是太低了吧！！

谢谢你的回答！对我的分析很有帮助！！！

再次感谢！！！
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生活、目标、信仰、改变。。。
15楼2010-04-26 23:02:32
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rivergf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-25 22:31:32:
我也曾遇到和楼主一样的情况，但是还没有这么厉害，只是中间出现一条带（就是把横行带分成了两部分）。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分，没有随着蛋白的移动而一起向下涌动，而是一直停留在加样孔中，阻止了 ...

对另外 刚才忘了说了 ，我觉得我的离心的不存在太大问题，我的离心条件是：12000g，4°C冷冻离心10min.
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生活、目标、信仰、改变。。。
16楼2010-04-26 23:08:37
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉是蛋白含有其他成分，移动速率不一样
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望大家都各有所获！
17楼2010-04-27 20:03:47
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