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rivergf

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家来看看我的SDS-PAGE图,为什么有些主带分成了好几条小带??? 已有11人参与

大家来看看我的SDS-PAGE图,为什么有些主带分成了好几条小带???


我的实验内容大致是这样的:酵母菌培养----取样----离心,收集沉淀----洗涤----沉淀加入裂解液(裂解液包括CHAPS、硫脲、尿素、DTT)----液氮研磨----离心,取上清做电泳!

为什么会出现这样的条带啊?

我的Marker跑的很好,说明胶应该没有问题,那就应该是我蛋白质样液出现了问题!到底是什么问题?有谁以前见过这种情况吗?

我先说声谢谢了!!!
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生活、目标、信仰、改变。。。
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hui_student

银虫 (小有名气)

★ ★
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scelab(金币+1):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 00:32
你说的处理液是什么意思?是上扬缓冲液么?
可能做的标本不一样,我做的细胞裂解,提细胞内蛋白质。加裂解裂解细胞,离心取上清(含目的蛋白),再加等体积2×上样缓冲液,煮沸5min,12000rpm,吸取上层做PAGE.
一路前行!
12楼2010-04-26 21:13:27
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rivergf

铜虫 (小有名气)

补充一下 大家应该也注意到了 Marker 旁边有条带也跑得不错,最右边的一条带也没有分裂。

到底是什么原因导致出现这样的图啊?!!!
生活、目标、信仰、改变。。。
2楼2010-04-25 19:51:04
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helloclare

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
每条泳道的样品都相同吗?怎么看起来条带都不一样啊
5楼2010-04-25 21:47:11
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hui_student

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也曾遇到和楼主一样的情况,但是还没有这么厉害,只是中间出现一条带(就是把横行带分成了两部分)。
可能的原因是蛋白样本中有颗粒性成分,没有随着蛋白的移动而一起向下涌动,而是一直停留在加样孔中,阻止了它下面的蛋白的电泳途径,而形成了楼主照片中的条带。我后来加长了样本离心转速,12000rpm,5min ,条带就好些了,没出现原来的情况了。
你可以试试,如果排除了这个原因,你再看看是不是像楼上说的胶做的不成型的原因,实验不顺利的原因很多种,需要慢慢分析与排除,祝好运!
一路前行!
6楼2010-04-25 22:31:32
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