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清风散人

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质sds-page电泳图分析

样品是未知蛋白(显然marker不合适),四张图中大片蓝色部位都是点的同一个样,可以说明那就是目的条带吗?还有,这些图都不理想,分别有什么问题?

这是四次电泳的图片,所有的样品都是从微生物发酵液中硫酸铵沉淀法提取的目的蛋白
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清风散人

铁虫 (小有名气)

非常好的帖子,正在看,感谢!
2楼2012-08-01 20:05:25
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
清风散人: 金币+1, ★★★很有帮助, 我的分离胶都超过三分之一了。缓冲液要是用新配的,电泳就特别快,只要四十多分钟,有点不正常。目的蛋白是小分子的,但是那个位置并不完全相同,所以不太确定。 2012-08-05 21:15:42
胶没跑好,不是很清晰,换新的电泳缓冲液,分离胶不能太短,大约应该占总胶的1/3。
Marker应该换个,现在最小条带的Marker有1kDa,不过需要Tricine-SDS-PAGE来跑,应该能满足你的要求。
那么小的分子,如果是特意提取的,你那位置基本上都是你的目的蛋白,要确认必须做个Western Bolting鉴定下。
关注我关注的
8楼2012-08-04 00:41:54
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 回帖置顶 2012-08-06 07:15:25
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 这个很到位 2012-08-06 07:15:39
引用回帖:
9楼: Originally posted by 清风散人 at 2012-08-05 21:11:32
四个图中大片蓝色都说明这个问题?谢~...

是的,一个蛋白质上样量再大,它的边缘也是齐整的,要是不齐整,那就肯定是有多个迁移率近似的蛋白质,你的斑点我分析如下,我在疑似有蛋白质条带的地方都标上箭头。另外传上我跑的电泳图,有一个蛋白质量较大,但是边缘齐整,注意比较和你的电泳条带的差别(第一个泳道是纯酶,其余泳道是含有该酶的各种样品,你可以根据纯酶的位置来确定这些样品中该酶的条带)。





流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2012-08-06 00:59:42
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
14楼: Originally posted by zzqbaidu at 2012-08-06 10:10:08
你的电泳图用啥相机拍的啊   这么清楚...

就是这东西


流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
16楼2012-08-06 15:04:23
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普通回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的目的蛋白是否是分子量很小?有点像样品被降解的感觉。操作过程中加蛋白酶抑制剂了吗?
3楼2012-08-01 20:57:09
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清风散人

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-01 20:57:09
你的目的蛋白是否是分子量很小?有点像样品被降解的感觉。操作过程中加蛋白酶抑制剂了吗?

是的,小分子蛋白,比marker最小的还小,所以应该在最下面。但是一直不确定是哪条:比如图2中marker带正常,旁边那两片深蓝色位置还不一样;图4也不知道marker左边的深色带跟右边的较规则的淡带是不是同一组分
4楼2012-08-01 21:26:21
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
虽然看着像是一个蓝色点,但是边缘不平整,肯定是多个蛋白质。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-08-01 23:47:32
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)

没跑开啊  换个浓度试试
帮忙点下我的网站http://www.yayadan.com 欢迎光临!
6楼2012-08-02 13:40:45
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议胶浓度配高点,然后Marker的话,加一个超低分子量Marker试试
7楼2012-08-02 22:45:03
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清风散人

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-01 23:47:32
虽然看着像是一个蓝色点,但是边缘不平整,肯定是多个蛋白质。

四个图中大片蓝色都说明这个问题?谢~
9楼2012-08-05 21:11:32
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清风散人

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zzqbaidu at 2012-08-02 13:40:45
没跑开啊  换个浓度试试

首先感谢~你说的是不是跟楼上的一个问题呢?是指大片蓝色没分开所以要调整浓度吗?但是我师兄用同样的浓度跑出来了的
10楼2012-08-05 21:13:02
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