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清风散人

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质sds-page电泳图分析

样品是未知蛋白(显然marker不合适),四张图中大片蓝色部位都是点的同一个样,可以说明那就是目的条带吗?还有,这些图都不理想,分别有什么问题?

这是四次电泳的图片,所有的样品都是从微生物发酵液中硫酸铵沉淀法提取的目的蛋白
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
清风散人: 金币+1, ★★★很有帮助, 我的分离胶都超过三分之一了。缓冲液要是用新配的,电泳就特别快,只要四十多分钟,有点不正常。目的蛋白是小分子的,但是那个位置并不完全相同,所以不太确定。 2012-08-05 21:15:42
胶没跑好,不是很清晰,换新的电泳缓冲液,分离胶不能太短,大约应该占总胶的1/3。
Marker应该换个,现在最小条带的Marker有1kDa,不过需要Tricine-SDS-PAGE来跑,应该能满足你的要求。
那么小的分子,如果是特意提取的,你那位置基本上都是你的目的蛋白,要确认必须做个Western Bolting鉴定下。
关注我关注的
8楼2012-08-04 00:41:54
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清风散人

铁虫 (小有名气)

非常好的帖子,正在看,感谢!
2楼2012-08-01 20:05:25
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的目的蛋白是否是分子量很小?有点像样品被降解的感觉。操作过程中加蛋白酶抑制剂了吗?
3楼2012-08-01 20:57:09
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清风散人

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-01 20:57:09
你的目的蛋白是否是分子量很小?有点像样品被降解的感觉。操作过程中加蛋白酶抑制剂了吗?

是的,小分子蛋白,比marker最小的还小,所以应该在最下面。但是一直不确定是哪条:比如图2中marker带正常,旁边那两片深蓝色位置还不一样;图4也不知道marker左边的深色带跟右边的较规则的淡带是不是同一组分
4楼2012-08-01 21:26:21
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