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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 半生一梦 at 2013-07-05 15:07:38
会不会是电泳仪出现故障啊 看你电泳时间是50min 我们一般电泳50V 20min左右呢

可能吧，但是同一电泳仪同一天还跑了蛋白胶，没说有问题，我再换个电泳仪试试吧
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11楼2013-07-05 15:29:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢这么耐心的回复 2013-07-06 09:03:21
引用回帖:
9楼: Originally posted by windycui at 2013-07-05 11:37:16
请问凝胶的冷却过程如何处理呢？胶是从微波炉里拿出来的，微波炉屋没有空调，凝胶屋空调大概25度左右，冷却一段时间，至手可以忍受的温度后加染料，然后倒入电泳槽子，有问题吗？...

一般不着急都是在室温自然冷却至四五十度后加染料到胶。如果着急的话可以用水冲冲容器加速冷却。
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12楼2013-07-05 15:57:44
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢提供意见 2013-07-06 09:02:16
调高电压 缩短时间
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13楼2013-07-05 20:51:52
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-06 02:04:02
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢提供意见 2013-07-06 09:02:36
第一可能是胶浓度问题，胶浓度过大不利于大分子DNA的移动，建议配置1%左右的胶，同时在加入TAX后可适当加入3-4ml的水，减少因沸腾蒸发的水。第二可以换个大点的电压试试，我一般是150V跑20min。第三就是你可以把胶从微波炉里拿出来之后确定都熔了就可以加燃料，然后倒在制胶板上冷却就可以，不用冷却一会再加。
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14楼2013-07-06 00:58:13
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by windycui at 2013-07-05 07:55:26
胶每次都是目测没有颗粒，完全透明后再降温的，请问如何熔胶才能没有可颗粒呢？
...

观察为晶莹透亮就可以了。。。一般都会再继续煮一下
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15楼2013-07-06 01:28:56
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alimastar

铜虫 (初入文坛)
90V50min??才跑这么点？？用的4500的marker，胶浓度多大？4500的marker貌似是7条带最亮带1200吧，你这个完全不对啊，再说最小的都没分开，很可能胶浓度太大，你看看吧
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对过去恋恋不舍的人，成就不了未来
16楼2013-07-06 10:20:54
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by alimastar at 2013-07-06 10:20:54
90V50min??才跑这么点？？用的4500的marker，胶浓度多大？4500的marker貌似是7条带最亮带1200吧，你这个完全不对啊，再说最小的都没分开，很可能胶浓度太大，你看看吧

1.2%的胶啊，4500的marker最亮的应该是1000的，所以我觉得特别诡异啊
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17楼2013-07-06 11:39:00
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
跑胶时间太长容易产热导致缓冲液温度升高，从而使样品发生降解
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18楼2013-07-06 15:27:33
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by joan198108 at 2013-07-06 15:27:33
跑胶时间太长容易产热导致缓冲液温度升高，从而使样品发生降解

是这个原因吗？我们那个电泳槽子在跑道20min的时候就有水蒸汽了，是散热不好吧？
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19楼2013-07-06 22:03:33
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by windycui at 2013-07-06 22:03:33
是这个原因吗？我们那个电泳槽子在跑道20min的时候就有水蒸汽了，是散热不好吧？...

现在好多电泳槽都是密闭的，虽然不易进去污染物，从而也导致水汽无法散出。有水汽正常，只要缓冲液温度没有明显升高就可以。
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20楼2013-07-07 09:16:03
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