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dongjingjia

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下

试剂        使用量
ddH2O        36.5µl
10× EasyTaq Buffer        5μL
dNTPs        4μL
特异引物P1        1μL
特异引物P2        1μL
拟南芥、水稻cDNA模板        2μL
EasyTaq DNA Polymerase        0.5μL
总体积        50μL
PCR扩增程序如下:95℃ 5min;(95℃ 30S;53℃ 40S;72℃ 2min)×30cycles;
72℃ 10min;4℃保温。
PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下
PCR结果图
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7个样本吗?可以适当提高退火温度试试,减少非特异性条带。

不是有6个样本,只是第离maker最近的条带没有跑出来,前三个泳道是一个gene,中间空了一个,后三个泳道又是另一个基因,用同一台PCR,P的,后三个不是太好,所以不知道是不是改改体系,或者其他的
4楼2013-10-27 11:43:18
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查看全部 13 个回答

dongjingjia

银虫 (初入文坛)

主要是后面几个条带不是很清楚,请问一下大家怎么解决
2楼2013-10-27 11:28:38
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dongjingjia: 金币+2, ★有帮助 2013-10-27 11:40:20
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-10-27 17:44:23
你有7个样本吗?可以适当提高退火温度试试,减少非特异性条带。
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
3楼2013-10-27 11:36:36
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-10-28 00:53:18
改下体系引物TM值,也可能是水稻cDNA纯度问题。
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
5楼2013-10-27 12:24:45
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