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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下

试剂        使用量
ddH2O        36.5µl
10× EasyTaq Buffer        5μL
dNTPs        4μL
特异引物P1        1μL
特异引物P2        1μL
拟南芥、水稻cDNA模板        2μL
EasyTaq DNA Polymerase        0.5μL
总体积        50μL
PCR扩增程序如下：95℃ 5min；（95℃ 30S；53℃ 40S；72℃ 2min）×30cycles；
72℃ 10min；4℃保温。
PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下
PCR结果图
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1楼 2013-10-27 11:25:39
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)
主要是后面几个条带不是很清楚，请问一下大家怎么解决
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2楼2013-10-27 11:28:38
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dongjingjia: 金币+2, ★有帮助 2013-10-27 11:40:20
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-27 17:44:23
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
3楼2013-10-27 11:36:36
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。

不是有6个样本，只是第离maker最近的条带没有跑出来，前三个泳道是一个gene，中间空了一个，后三个泳道又是另一个基因，用同一台PCR，P的，后三个不是太好，所以不知道是不是改改体系，或者其他的
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4楼2013-10-27 11:43:18
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-28 00:53:18
改下体系引物TM值，也可能是水稻cDNA纯度问题。
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
5楼2013-10-27 12:24:45
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grape_vine

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。

后三个要是再增加退货温度,我估计扩增量应该不会再增加很多了吧,感觉换个引物是不是更靠普
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6楼2013-10-27 21:22:48
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece
引用回帖:
6楼: Originally posted by grape_vine at 2013-10-27 21:22:48
后三个要是再增加退货温度,我估计扩增量应该不会再增加很多了吧,感觉换个引物是不是更靠普...

如果有其他引物，换的试下当然更好
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7楼2013-10-27 21:33:49
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 21:33:49
如果有其他引物，换的试下当然更好...

因为引物都是老师设计好的，我感觉前三个可以p出来，那么引物应该没什么问题吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2013-10-27 23:21:52
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by dongjingjia at 2013-10-27 23:21:52
因为引物都是老师设计好的，我感觉前三个可以p出来，那么引物应该没什么问题吧
...

我以前用12个引物跑过52个不同样本，其中每一种引物对不同的样本p出来的都不尽相同，另外，问下lz你用的是一对特异性引物，是做基因克隆？
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9楼2013-10-28 10:32:50
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-28 10:32:50
我以前用12个引物跑过52个不同样本，其中每一种引物对不同的样本p出来的都不尽相同，另外，问下lz你用的是一对特异性引物，是做基因克隆？...

就是做基因克隆

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2013-10-28 22:26:43
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