24小时热门版块排行榜    

查看: 927  |  回复: 3

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR图,看不明白了 已有2人参与


如上图,从右至左为ITS4/5于55度扩增同种三批样品,特异引物54度扩增不同种(可能为三种)五批样品,特异引物60度扩增不同种(可能为三种)五批样品,ITS4/5于52度扩增同种三批样品;体系以DL2000间隔点样,随行空白。特异引物依据图中300bp左右单一亮带的种设计,由图上(特异引物60度扩增)应该可以判断确实可将该种与其他种加以区别。



但后来将上面经过ITS4/5扩增阳性的产物用上述特异引物进行巢氏PCR,(设计特异引物的那个种),分别用60度常规PCR和65-60度梯度PCR,结果一致,都出现多条带,而且应为目的带的300bp处不是最亮的(忽略第二道,可能为操作失误)。不明白为什么会有这种情况出现。单用该特异引物扩增只出现一条带的啊,用巢氏应该条带更单一才对的啊。求大家帮忙分析分析哈
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
巢式再做一次,提高退火温度
2楼2010-12-23 15:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-23 15:16:39:
巢式再做一次,提高退火温度

那为什么常规60度就能得到单带呢
3楼2010-12-23 15:23:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)

这个很难说,与引物和模板序列都有关系。或者直接回收第一次的PCR产物去测序
4楼2010-12-23 15:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lhm_hnyj 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见