应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合PCR请帮忙看看图片吧
71/1返回列表
查看: 1536  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 融合PCR请帮忙看看图片吧 已有2人参与

我两个条带 一个是1680bp；另一个是2550bp ,然后融合，第二轮PCR不加引物，其他同常规PCR；用的是LAtaq酶。融合之后既有融合片段，又有原始的两条片段！可是当我进行完第三轮pcr之后（此时加入的引物为2550bp上游引物 和 1680bp的下游引物），跑胶发现第二轮pcr跑胶图片中原始条带2550bp不怎么亮的带，第三轮却是出奇的亮啊！而融合片段却不怎么亮，求解啊？（1KBmarker 和 Hind111）融合PCR请帮忙看看图片吧
第二轮pcr图片
融合PCR请帮忙看看图片吧-1
第三轮PCR图片

[ Last edited by jiaoxiayoulu on 2014-3-5 at 17:14 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-05 17:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiaoxiayoulu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 01:10:11
第二轮PCR不加引物，其他同常规PCR，此时循环数设为7-8，然后加引物，扩增。
如需大量扩增，以第二轮的作为模板（1ul），进行扩增。可稍微提高下退火温度。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-05 17:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-05 17:14:50
第二轮PCR不加引物，其他同常规PCR，此时循环数设为7-8，然后加引物，扩增。
如需大量扩增，以第二轮的作为模板（1ul），进行扩增。可稍微提高下退火温度。

我第一轮没用高保真酶，用的普通taq酶！第二轮我设置了20个循环，目的是让他尽可能多的产生融合片段！第三轮PCR时我以第二轮产物（没做胶回收，也没有纯化）为模板，左边条带为取了10ul二轮产物，右边条带我是取了5ul二轮产物为模板。我想知道，为什么二轮PCR小条带很亮，而三轮PCR大条带却很亮？？？？？？？
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-05 18:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
内容已删除
回复此楼
4楼2014-03-05 19:43:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)
Gibson？
回复此楼
我不会！
5楼2014-03-05 20:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-03-05 20:16:20
Gibson？

????
回复此楼
6楼2014-03-05 20:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiaoxiayoulu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 01:10:23
你这两次加的样量一样吗？再一个你把两次结果放一块跑跑。再一个你第三次PCR模板不要加太多，我们一般稀释一百倍再跑。
赞一下 回复此楼
hehe
7楼2014-03-05 21:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiaoxiayoulu 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭