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feiye2214

木虫 (正式写手)

[求助] Genome Walking 上图啦,大伙帮忙看看怎么提高PCR质量

下面的是我买了宝生物的Genome Walking Kit做的PCR图,A2组好像效果还是有的,但是怎么才能提高特异性呢,当然是得到明显的特异性条带才能接着克隆测序啊,了解的大侠给点支持啊。谢谢了先
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-04-19 13:49:47
你这种跑电泳的方式不对,应该A1的放在一起
个人感觉你的这几个都不对,应该是片段大小逐渐缩小
如果做得好的话,直接PCR产物测序就可以
我当时就是直接PCR产物测序
2楼2011-04-18 09:25:44
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-04-18 09:25:44:
你这种跑电泳的方式不对,应该A1的放在一起
个人感觉你的这几个都不对,应该是片段大小逐渐缩小
如果做得好的话,直接PCR产物测序就可以
我当时就是直接PCR产物测序

敢问大侠,如何才能做的好呢?给点意见呗
3楼2011-04-18 09:44:24
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+3): 经验很重要 2011-04-18 23:42:16
feiye2214(金币+5): 多谢指点 2011-04-19 13:15:35
西瓜(金币+3, EPI+1): 楼主说解决了问题,帮你申请的EPI,呵呵~ 2011-04-19 14:29:52
“当然是得到明显的特异性条带才能接着克隆测序啊”为什么这么想呢,你的目的是得到基因序列,纠结与此没必要啊,我只用三个库(精选),作到2A4这种程度就切胶克隆测序了,3周顺利拿到3K的序列,用最快的时间把这关过了,拿到序列干正经事吧
生命不息,探索不止。
4楼2011-04-18 21:56:40
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周兵lofter

新虫 (小有名气)

个人感觉 你从第二次pcr到第三步pcr  稀释的倍数不够 。。  你稀释了多少倍?稀释倍数多了  你看看3A2能不能有单一条带出现。
乐观向上 积极拼搏 热爱生命 用心生活
5楼2014-04-17 12:52:36
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