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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Genome Walking 上图啦，大伙帮忙看看怎么提高PCR质量
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[求助] Genome Walking 上图啦，大伙帮忙看看怎么提高PCR质量

下面的是我买了宝生物的Genome Walking Kit做的PCR图，A2组好像效果还是有的，但是怎么才能提高特异性呢，当然是得到明显的特异性条带才能接着克隆测序啊，了解的大侠给点支持啊。谢谢了先
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1楼 2011-04-18 09:04:15
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-04-19 13:49:47
你这种跑电泳的方式不对，应该A1的放在一起
个人感觉你的这几个都不对，应该是片段大小逐渐缩小
如果做得好的话，直接PCR产物测序就可以
我当时就是直接PCR产物测序
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2楼2011-04-18 09:25:44
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feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-04-18 09:25:44:
你这种跑电泳的方式不对，应该A1的放在一起
个人感觉你的这几个都不对，应该是片段大小逐渐缩小
如果做得好的话，直接PCR产物测序就可以
我当时就是直接PCR产物测序

敢问大侠，如何才能做的好呢？给点意见呗
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3楼2011-04-18 09:44:24
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+3): 经验很重要 2011-04-18 23:42:16
feiye2214(金币+5): 多谢指点 2011-04-19 13:15:35
西瓜(金币+3, EPI+1): 楼主说解决了问题，帮你申请的EPI，呵呵~ 2011-04-19 14:29:52
“当然是得到明显的特异性条带才能接着克隆测序啊”为什么这么想呢，你的目的是得到基因序列，纠结与此没必要啊，我只用三个库（精选），作到2A4这种程度就切胶克隆测序了，3周顺利拿到3K的序列，用最快的时间把这关过了，拿到序列干正经事吧。
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生命不息，探索不止。
4楼2011-04-18 21:56:40
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周兵lofter

新虫 (小有名气)
个人感觉 你从第二次pcr到第三步pcr  稀释的倍数不够 。。  你稀释了多少倍？稀释倍数多了  你看看3A2能不能有单一条带出现。
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乐观向上 积极拼搏 热爱生命 用心生活
5楼2014-04-17 12:52:36
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