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小小树虫

银虫 (小有名气)

[交流] 求大虫帮忙看看通用引物PCR跑胶结果 已有7人参与

求大神指点 通用引物扩增后如图的效果是因为PCR条件没设置好,还是其他原因导致扩增条带很弱。这个结果有用吗?M=1200

矩形框内为扩增条带


[ Last edited by 小小树虫 on 2012-8-9 at 10:09 ]
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+4, 感谢发帖帮助回答问题。 2012-08-09 19:50:10
amisking: 回帖置顶 2012-08-09 19:50:11
降低退火温度或者使用touch down程序;
若循环数不到30就增加循环数;
增加Mg2+浓度,最好设置一系列梯度;
模板纯吗?不纯的话就纯化,或者添加BSA和tween20;
以上不行就可能是Taq或dNTP变质,请重新更换一批新试剂。
4楼2012-08-09 19:09:23
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普通回帖

cxfans

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我感觉你模板加的少了 适当加一下模板 也有可能退火温度有点高 不如设一个温度梯度试试
2楼2012-08-09 10:16:45
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
亮度偏低,可以增加循环次数或者增加模板浓度试试
3楼2012-08-09 17:50:44
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小小树虫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by coal@live.cn at 2012-08-09 19:09:23
降低退火温度或者使用touch down程序;
若循环数不到30就增加循环数;
增加Mg2+浓度,最好设置一系列梯度;
模板纯吗?不纯的话就纯化,或者添加BSA和tween20;
以上不行就可能是Taq或dNTP变质,请重新更换一批 ...

嗯 谢谢指导!学习了
5楼2012-08-09 20:15:24
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小小树虫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cxfans at 2012-08-09 10:16:45
我感觉你模板加的少了 适当加一下模板 也有可能退火温度有点高 不如设一个温度梯度试试

嗯 多谢指导
6楼2012-08-09 20:15:46
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小小树虫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2012-08-09 17:50:44
亮度偏低,可以增加循环次数或者增加模板浓度试试

嗯 明天按你们说的在P一下试试,多谢!
7楼2012-08-09 20:16:34
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jl860822

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议你做一下二次PCR试试,效果可能会好点
8楼2012-08-10 08:43:14
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匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-10 13:49:08
本帖仅楼主可见
9楼2012-08-10 08:47:51
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王贤卓

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
扩增少了,好多原因:模板少了,引物出现二聚体,buffer出现问题,扩增体系中有抑制物,退火温度高了,延伸时间短了。。。
10楼2012-08-10 09:07:55
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