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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求大虫帮忙看看通用引物PCR跑胶结果
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小小树虫

银虫 (小有名气)

[交流] 求大虫帮忙看看通用引物PCR跑胶结果 已有7人参与

求大神指点 通用引物扩增后如图的效果是因为PCR条件没设置好，还是其他原因导致扩增条带很弱。这个结果有用吗？M=1200

矩形框内为扩增条带


[ Last edited by 小小树虫 on 2012-8-9 at 10:09 ]
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1楼 2012-08-09 10:05:38
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我感觉你模板加的少了 适当加一下模板 也有可能退火温度有点高 不如设一个温度梯度试试
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2楼2012-08-09 10:16:45
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
亮度偏低，可以增加循环次数或者增加模板浓度试试
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3楼2012-08-09 17:50:44
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+4, 感谢发帖帮助回答问题。 2012-08-09 19:50:10
amisking: 回帖置顶 2012-08-09 19:50:11
降低退火温度或者使用touch down程序；
若循环数不到30就增加循环数；
增加Mg2+浓度，最好设置一系列梯度；
模板纯吗？不纯的话就纯化，或者添加BSA和tween20；
以上不行就可能是Taq或dNTP变质，请重新更换一批新试剂。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-09 19:09:23
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小小树虫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by coal@live.cn at 2012-08-09 19:09:23
降低退火温度或者使用touch down程序；
若循环数不到30就增加循环数；
增加Mg2+浓度，最好设置一系列梯度；
模板纯吗？不纯的话就纯化，或者添加BSA和tween20；
以上不行就可能是Taq或dNTP变质，请重新更换一批 ...

嗯 谢谢指导！学习了
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5楼2012-08-09 20:15:24
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小小树虫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cxfans at 2012-08-09 10:16:45
我感觉你模板加的少了 适当加一下模板 也有可能退火温度有点高 不如设一个温度梯度试试

嗯 多谢指导
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6楼2012-08-09 20:15:46
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小小树虫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2012-08-09 17:50:44
亮度偏低，可以增加循环次数或者增加模板浓度试试

嗯 明天按你们说的在P一下试试，多谢！
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-09 20:16:34
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议你做一下二次PCR试试，效果可能会好点
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8楼2012-08-10 08:43:14
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-10 13:49:08
本帖仅楼主可见
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9楼2012-08-10 08:47:51
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王贤卓

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩增少了，好多原因：模板少了，引物出现二聚体，buffer出现问题，扩增体系中有抑制物，退火温度高了，延伸时间短了。。。
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10楼2012-08-10 09:07:55
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