应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物的PCR Tm值 请教
81/1返回列表
查看: 1446  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物的PCR Tm值 请教

我设计了几种引物，长度都为18bp，用公式 Tm=4(G+C)+2(A+T)-5℃  计算得Tm值为43℃左右，那PCR时按算法 Tm-5℃ 设退火温度时，退火温度就只有三十几摄氏度了，这样设的话退火温度是不是太低？合理吗？怎么设置退火温度比较合理啊？
我其中一对引物为 5‘-AAGACTCCTATCACTATG-3’  Tm 45℃
                             5‘-TAAAAGATTTGTGGCATA-3’  Tm 41℃

       谢谢指教!

[ Last edited by lilirong2009 on 2010-11-17 at 17:27 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2010-11-17 17:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)
算的时候不用减5，实际用的时候减
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-17 18:53:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzz

木虫 (正式写手)
3末端最好不要是A吧
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-17 21:17:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
为什么不用Oligo6软件呢？
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-17 21:49:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
实践出真知，出的来才是硬道理
跑一下就知道了
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-17 21:55:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
能p出来 就是好引物。   tm 都是浮云。
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-17 23:38:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)
把引物序列延长一下 Tm就上去了
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-17 23:45:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
我的经验公式：50mM [Na+]的Tm值加上5~10度，最近做了一次，加到15度都能扩出来
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-11-18 00:07:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilirong2009 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭