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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » PCR产物图 请问是不是DNA模板被污染了？
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chensuya

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物图 请问是不是DNA模板被污染了？已有5人参与

学弟做的PCR产物电泳图（没有加marker），怎么改进呢？

PCR产物图 请问是不是DNA模板被污染了？
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当你真心想做一件事，全世界都会联合起来帮助你
1楼2014-05-02 10:52:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有拖尾不一定代表被污染了，引物特异性、引物浓度、退火温度、酶浓度等等都可能造成这种问题啊。
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2楼2014-05-02 14:53:21
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wubingqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chensuya: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-04 11:48:46
1.模版用量过高
2.电泳时电压过大
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6楼2014-05-04 08:45:39
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普通回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先降低模版用量（稀释后用），电泳电压不要太高。还不行，就如楼上所述逐个考虑。
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学习使你立于不败之地
3楼2014-05-02 16:01:02
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cx13033236

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不加maker就不知道P的结果是不是你要的目标片段啊，说什么条件改变都没用。
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4楼2014-05-03 10:22:50
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熬夜上网

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用基因组放模板p的？

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5楼2014-05-04 08:42:40
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chensuya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cx13033236 at 2014-05-03 10:22:50
不加maker就不知道P的结果是不是你要的目标片段啊，说什么条件改变都没用。

为了节省，先看看有没有扩增出来，，，
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当你真心想做一件事，全世界都会联合起来帮助你
7楼2014-05-04 11:43:43
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chensuya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wubingqi at 2014-05-04 08:45:39
1.模版用量过高
2.电泳时电压过大

2微升，我们一直都用的是90mA，120V。。。。。。
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当你真心想做一件事，全世界都会联合起来帮助你
8楼2014-05-04 11:45:58
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chensuya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 熬夜上网 at 2014-05-04 08:42:40
用基因组放模板p的？

乳酸菌DNA，貌似学弟的DNA没有提取好，量特别少
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当你真心想做一件事，全世界都会联合起来帮助你
9楼2014-05-04 11:48:21
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熬夜上网

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by chensuya at 2014-05-04 11:48:21
乳酸菌DNA，貌似学弟的DNA没有提取好，量特别少...

基因组的话我倒是遇到过类似情况，非特异性扩增的小片段比较多，造成了整个泳道几乎都是亮的情况。

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10楼2014-05-04 12:05:07
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