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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » PCR产物图 请问是不是DNA模板被污染了？
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查看: 2014  |  回复: 17
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chensuya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 熬夜上网 at 2014-05-04 12:05:07
基因组的话我倒是遇到过类似情况，非特异性扩增的小片段比较多，造成了整个泳道几乎都是亮的情况。
...

那你后来怎么优化条件的呢？有没有P出来？
还有想问下，PCR扩增后的产物要拿去测序，扩增出来后要做什么处理？没找到相关的操作资料。。。新手求助。。。
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11楼2014-05-04 12:13:19
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G3CCTV5

木虫 (著名写手)
把退火温度调高一点儿

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12楼2014-05-04 12:13:20
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chensuya

新虫 (小有名气)
已经53度了，做出来效果差不多

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13楼2014-05-04 12:25:10
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lairongpeng

银虫 (正式写手)
提高退火温度，减少延伸时间

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14楼2014-05-04 12:30:57
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chensuya

新虫 (小有名气)
嗯嗯，试试！！！

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15楼2014-05-04 12:34:58
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熬夜上网

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by chensuya at 2014-05-04 12:13:19
那你后来怎么优化条件的呢？有没有P出来？
还有想问下，PCR扩增后的产物要拿去测序，扩增出来后要做什么处理？没找到相关的操作资料。。。新手求助。。。...

主要是我的目的条带还算清晰，所以我就没优化方法了。之前我看到有人回你稀释模板，你可以试试，反正大概宗旨就是让模板杂物少一点呗。p以后，连T载，转化，送测吧。应该是这个步骤。

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16楼2014-05-04 13:05:36
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lp198201

新虫 (初入文坛)
减少扩增循环数，降低电压至80V，跑的太丑了，我老板看到这个结果就得给我把胶扔了，另外你的电泳槽尺子厚度太厚，有条件的话可以换成0.5mm厚度，非常漂亮。
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chensuya
17楼2014-05-04 21:36:49
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chensuya

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by lp198201 at 2014-05-04 21:36:49
减少扩增循环数，降低电压至80V，跑的太丑了，我老板看到这个结果就得给我把胶扔了，另外你的电泳槽尺子厚度太厚，有条件的话可以换成0.5mm厚度，非常漂亮。

扔了。。。真是中国好老板啊！菜鸟一只，受教了！谢谢！

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当你真心想做一件事，全世界都会联合起来帮助你
18楼2014-05-04 23:11:50
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