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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果出现弥散现象
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皇猪

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果出现弥散现象

各位道友：
   最近我做ITS序列标记实验，PCR结果如下图所示，在成像结果中可以看到弥散现象，这是怎么一回事？？？

  对于这个问题，我做了引物梯度实验、DNA模板梯度实验，结果还是一样，
模板DNA的A260/A280比值为1.89,纯度还可以，求研友帮忙分析下，是什么原因造成弥散现象的！！！
PCR结果出现弥散现象
RLBN4JLE$2N5D9C9UYO0KO5.jpg
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
1楼 2013-06-03 19:32:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
染料 电泳缓冲液的问题应该不大 不然marker 应该也会出现弥散。
问下 楼主的 模板是什么  ？ 土壤DNA 样品还是  反转录以后的 cDNA 还是巢式PCR 的第一轮产物？

如果是 土壤DNA ， 那么恭喜你 这玩意不好去 ，就将就做吧 ，要么重换试剂盒提DNA 要么就割胶纯化条带继续；
如果是反转录、第一轮PCR 产物， 那一般是因为模板过量或者上一轮反应中的酶啊什么的 没有去处吧。 要不你做个pcr产物纯化之后，之后再用作模板扩增试试看。
希望你试 之后  上来说说说你的结果。
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11楼2013-06-05 13:54:55
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灵动的心

银虫 (小有名气)
是否加样过多呢（根据全式金公司的说法，加样过多也会出现这种情况）！
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12楼2013-06-05 19:56:49
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wangzongda

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-05 10:47:18
加入一定量DMSO试试
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Jet wang
10楼2013-06-04 22:12:20
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普通回帖

funds

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 12:13:10
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-04 18:13:27
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了，PCR不可能出现这种情况的。
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2楼2013-06-04 09:08:18
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皇猪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by funds at 2013-06-04 09:08:18
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了，PCR不可能出现这种情况的。

我用的是通用引物，应该不会有问题的！！！
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
3楼2013-06-04 12:05:13
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 14:01:02
但从这张图来看，以我以前碰到的情况，一是模板浓度太高，二是模板不纯，有杂蛋白污染，三是电泳缓冲液不新鲜，不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度，这就奇怪了，是否你的模板没有足够稀释呢，这种情况应该与引物关系不大
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4楼2013-06-04 13:50:08
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皇猪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 13:50:08
但从这张图来看，以我以前碰到的情况，一是模板浓度太高，二是模板不纯，有杂蛋白污染，三是电泳缓冲液不新鲜，不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度，这就奇怪了，是否你的模板没有足够稀释呢，这种情况应该与引 ...

模板是分管稀释的，保存母板，稀释应该没问题，电泳缓冲液我特意新换了一下，应该也没什么问题，纠结。
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
5楼2013-06-04 14:03:24
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 皇猪 at 2013-06-04 14:03:24
模板是分管稀释的，保存母板，稀释应该没问题，电泳缓冲液我特意新换了一下，应该也没什么问题，纠结。...

唉 这就不知道啥情况了
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6楼2013-06-04 14:37:08
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 21:11:03
有的时候染料也会有一定的影响的，不知你的是不是这个问题
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7楼2013-06-04 17:00:17
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皇猪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lihongyue328 at 2013-06-04 17:00:17
有的时候染料也会有一定的影响的，不知你的是不是这个问题

对哟，明天换个染料试试
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
8楼2013-06-04 21:11:29
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-05 10:47:08
本帖仅楼主可见
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9楼2013-06-04 22:04:40
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