[求助] PCR结果出现弥散现象

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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别

1楼2013-06-03 19:32:28

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老夏853

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染料电泳缓冲液的问题应该不大不然marker 应该也会出现弥散。
问下楼主的模板是什么？土壤DNA 样品还是反转录以后的 cDNA 还是巢式PCR 的第一轮产物？

如果是土壤DNA ，那么恭喜你这玩意不好去，就将就做吧，要么重换试剂盒提DNA 要么就割胶纯化条带继续；
如果是反转录、第一轮PCR 产物，那一般是因为模板过量或者上一轮反应中的酶啊什么的没有去处吧。要不你做个pcr产物纯化之后，之后再用作模板扩增试试看。
希望你试之后上来说说说你的结果。

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11楼2013-06-05 13:54:55

灵动的心

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是否加样过多呢（根据全式金公司的说法，加样过多也会出现这种情况）！

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12楼2013-06-05 19:56:49

wangzongda

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Jet wang

10楼2013-06-04 22:12:20

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funds

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可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了，PCR不可能出现这种情况的。

2楼2013-06-04 09:08:18

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引用回帖:

2楼: Originally posted by funds at 2013-06-04 09:08:18
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了，PCR不可能出现这种情况的。

我用的是通用引物，应该不会有问题的！！！

没有梦想，那跟咸鱼有什么分别

3楼2013-06-04 12:05:13

songzuowei

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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 14:01:02

但从这张图来看，以我以前碰到的情况，一是模板浓度太高，二是模板不纯，有杂蛋白污染，三是电泳缓冲液不新鲜，不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度，这就奇怪了，是否你的模板没有足够稀释呢，这种情况应该与引物关系不大

4楼2013-06-04 13:50:08

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引用回帖:

4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 13:50:08
但从这张图来看，以我以前碰到的情况，一是模板浓度太高，二是模板不纯，有杂蛋白污染，三是电泳缓冲液不新鲜，不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度，这就奇怪了，是否你的模板没有足够稀释呢，这种情况应该与引 ...

模板是分管稀释的，保存母板，稀释应该没问题，电泳缓冲液我特意新换了一下，应该也没什么问题，纠结。

没有梦想，那跟咸鱼有什么分别

5楼2013-06-04 14:03:24