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皇猪

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果出现弥散现象

各位道友:
   最近我做ITS序列标记实验,PCR结果如下图所示,在成像结果中可以看到弥散现象,这是怎么一回事???

  对于这个问题,我做了引物梯度实验、DNA模板梯度实验,结果还是一样,
模板DNA的A260/A280比值为1.89,纯度还可以,求研友帮忙分析下,是什么原因造成弥散现象的!!!
PCR结果出现弥散现象
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

染料 电泳缓冲液的问题应该不大 不然marker 应该也会出现弥散。
问下 楼主的 模板是什么  ? 土壤DNA 样品还是  反转录以后的 cDNA 还是巢式PCR 的第一轮产物?

如果是 土壤DNA , 那么恭喜你 这玩意不好去 ,就将就做吧 ,要么重换试剂盒提DNA 要么就割胶纯化条带继续;
如果是反转录、第一轮PCR 产物, 那一般是因为模板过量或者上一轮反应中的酶啊什么的 没有去处吧。 要不你做个pcr产物纯化之后,之后再用作模板扩增试试看。
希望你试 之后  上来说说说你的结果。
11楼2013-06-05 13:54:55
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灵动的心

银虫 (小有名气)

是否加样过多呢(根据全式金公司的说法,加样过多也会出现这种情况)!
12楼2013-06-05 19:56:49
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wangzongda

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-05 10:47:18
加入一定量DMSO试试
Jet wang
10楼2013-06-04 22:12:20
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普通回帖

funds

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 12:13:10
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-04 18:13:27
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了,PCR不可能出现这种情况的。
2楼2013-06-04 09:08:18
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皇猪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by funds at 2013-06-04 09:08:18
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了,PCR不可能出现这种情况的。

我用的是通用引物,应该不会有问题的!!!
没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
3楼2013-06-04 12:05:13
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 14:01:02
但从这张图来看,以我以前碰到的情况,一是模板浓度太高,二是模板不纯,有杂蛋白污染,三是电泳缓冲液不新鲜,不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度,这就奇怪了,是否你的模板没有足够稀释呢,这种情况应该与引物关系不大
4楼2013-06-04 13:50:08
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皇猪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 13:50:08
但从这张图来看,以我以前碰到的情况,一是模板浓度太高,二是模板不纯,有杂蛋白污染,三是电泳缓冲液不新鲜,不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度,这就奇怪了,是否你的模板没有足够稀释呢,这种情况应该与引 ...

模板是分管稀释的,保存母板,稀释应该没问题,电泳缓冲液我特意新换了一下,应该也没什么问题,纠结。
没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
5楼2013-06-04 14:03:24
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songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 皇猪 at 2013-06-04 14:03:24
模板是分管稀释的,保存母板,稀释应该没问题,电泳缓冲液我特意新换了一下,应该也没什么问题,纠结。...

唉 这就不知道啥情况了
6楼2013-06-04 14:37:08
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 21:11:03
有的时候染料也会有一定的影响的,不知你的是不是这个问题
7楼2013-06-04 17:00:17
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皇猪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lihongyue328 at 2013-06-04 17:00:17
有的时候染料也会有一定的影响的,不知你的是不是这个问题

对哟,明天换个染料试试
没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
8楼2013-06-04 21:11:29
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匿名

用户注销 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-05 10:47:08
本帖仅楼主可见
9楼2013-06-04 22:04:40
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