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皇猪

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果出现弥散现象

各位道友:
   最近我做ITS序列标记实验,PCR结果如下图所示,在成像结果中可以看到弥散现象,这是怎么一回事???

  对于这个问题,我做了引物梯度实验、DNA模板梯度实验,结果还是一样,
模板DNA的A260/A280比值为1.89,纯度还可以,求研友帮忙分析下,是什么原因造成弥散现象的!!!
PCR结果出现弥散现象
RLBN4JLE$2N5D9C9UYO0KO5.jpg
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 21:11:03
有的时候染料也会有一定的影响的,不知你的是不是这个问题
7楼2013-06-04 17:00:17
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funds

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 12:13:10
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-04 18:13:27
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了,PCR不可能出现这种情况的。
2楼2013-06-04 09:08:18
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皇猪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by funds at 2013-06-04 09:08:18
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了,PCR不可能出现这种情况的。

我用的是通用引物,应该不会有问题的!!!
没有梦想,那跟咸鱼有什么分别
3楼2013-06-04 12:05:13
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 14:01:02
但从这张图来看,以我以前碰到的情况,一是模板浓度太高,二是模板不纯,有杂蛋白污染,三是电泳缓冲液不新鲜,不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度,这就奇怪了,是否你的模板没有足够稀释呢,这种情况应该与引物关系不大
4楼2013-06-04 13:50:08
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