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xjzw

新虫 (小有名气)

[求助] 棉花基因组DNA，来做tublin的PCR,可是做了好多次了，连弥散都没有

我是新手，刚刚开始做实验。用棉花基因组DNA，稀释了10倍，来做tublin（一个内参基因）的PCR,目的是检测基因的完整性，可是做了好多次了，连弥散都没有，各位高手，谁能帮我分析一下原因，非常感谢！！退火温度是42度，酶也是老师才给订的，老师让我快点做，所以基因组只是粗提了下，没有加RNA酶，也没有加KAc。基因组DNA条带都可以，老师也看了的，可是就是p不出来，很郁闷，都1个星期了。
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1楼 2012-11-04 22:52:22
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-06 17:15:54
影响PCR的因素很多，模板，引物，退火温度，延伸时间等等，都可能导致PCR不成功，你提的DNA只跑了电泳吗?测浓度没有？如果模板中有机溶液没除干净是会影响PCR的，一项一项排除吧。
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2楼2012-11-05 12:35:05
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200509757

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先你将你的基因组DNA跑胶看一下，有没有提取到；然后将你的引物和基因组DNA让你的师兄师姐帮你跑一边PCR，看看有没有！
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3楼2012-11-05 14:24:41
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
内容已删除
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4楼2012-11-05 14:37:35
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xjzw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2012-11-05 12:35:05
影响PCR的因素很多，模板，引物，退火温度，延伸时间等等，都可能导致PCR不成功，你提的DNA只跑了电泳吗?测浓度没有？如果模板中有机溶液没除干净是会影响PCR的，一项一项排除吧。

我提的DNA只是电泳了一下，老师也看了，觉得可以，就马上让我去PCR了，条带的亮度还可以和那个750bp的亮度算是一个层次的，没有测那个OD值。我似乎也觉得我的模板中无机盐多了点，因为我打算用KAc除盐的，老师那阵嫌我提的慢了，催我了，我就没有加RNA酶和KAc了，就是个粗提取，不过我也用70%和无水乙醇洗过的，然后就加的TE缓冲液，后面不行就再细提前一下，谢谢！！！
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5楼2012-11-05 21:39:16
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xjzw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 200509757 at 2012-11-05 14:24:41
首先你将你的基因组DNA跑胶看一下，有没有提取到；然后将你的引物和基因组DNA让你的师兄师姐帮你跑一边PCR，看看有没有！

DNA电泳有结果的，老师都看过的。你的建议挺好，不行让我师哥操作一下，看看是不是操作问题，毕竟这也是一方面，谢谢！！！
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6楼2012-11-05 21:42:14
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xjzw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangqi20092 at 2012-11-05 14:37:35
把提的基因组DNA图片发过来看看，然后你用的引物是不是好的？你PCR的试剂是不是能用？退火温度是不是合适，这都影响PCR，具体可以联系我380270985

那个电泳仪的电脑老师怕U盘传播病毒，没有让拷，不过老师给看的，说DNA可以。至于你说的其他可能性，我也觉得是材料的问题，就是个内参基因都P不出来，运气再查，我也做了一个星期了，都什么也没有，退火温度最低选的42都没有弥散。后来老师让我别P了，现在我忙着设计引物呢，那个就放下了。如果后面我有什么问题，我再联系你吧，谢谢你了！！！
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7楼2012-11-05 21:47:44
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romantic昊

新虫 (初入文坛)
请问你还在做棉花这一块吗
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8楼2015-10-15 00:55:12
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