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xjzw

新虫 (小有名气)

[求助] 棉花基因组DNA,来做tublin的PCR,可是做了好多次了,连弥散都没有

我是新手,刚刚开始做实验。用棉花基因组DNA,稀释了10倍,来做tublin(一个内参基因)的PCR,目的是检测基因的完整性,可是做了好多次了,连弥散都没有,各位高手,谁能帮我分析一下原因,非常感谢!!退火温度是42度,酶也是老师才给订的,老师让我快点做,所以基因组只是粗提了下,没有加RNA酶,也没有加KAc。基因组DNA条带都可以,老师也看了的,可是就是p不出来,很郁闷,都1个星期了。
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-06 17:15:54
影响PCR的因素很多,模板,引物,退火温度,延伸时间等等,都可能导致PCR不成功,你提的DNA只跑了电泳吗?测浓度没有?如果模板中有机溶液没除干净是会影响PCR的,一项一项排除吧。
2楼2012-11-05 12:35:05
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200509757

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先你将你的基因组DNA跑胶看一下,有没有提取到;然后将你的引物和基因组DNA让你的师兄师姐帮你跑一边PCR,看看有没有!
3楼2012-11-05 14:24:41
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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内容已删除
4楼2012-11-05 14:37:35
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xjzw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2012-11-05 12:35:05
影响PCR的因素很多,模板,引物,退火温度,延伸时间等等,都可能导致PCR不成功,你提的DNA只跑了电泳吗?测浓度没有?如果模板中有机溶液没除干净是会影响PCR的,一项一项排除吧。

我提的DNA只是电泳了一下,老师也看了,觉得可以,就马上让我去PCR了,条带的亮度还可以和那个750bp的亮度算是一个层次的,没有测那个OD值。我似乎也觉得我的模板中无机盐多了点,因为我打算用KAc除盐的,老师那阵嫌我提的慢了,催我了,我就没有加RNA酶和KAc了,就是个粗提取,不过我也用70%和无水乙醇洗过的,然后就加的TE缓冲液,后面不行就再细提前一下,谢谢!!!
5楼2012-11-05 21:39:16
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xjzw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 200509757 at 2012-11-05 14:24:41
首先你将你的基因组DNA跑胶看一下,有没有提取到;然后将你的引物和基因组DNA让你的师兄师姐帮你跑一边PCR,看看有没有!

DNA电泳有结果的,老师都看过的。你的建议挺好,不行让我师哥操作一下,看看是不是操作问题,毕竟这也是一方面,谢谢!!!
6楼2012-11-05 21:42:14
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xjzw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangqi20092 at 2012-11-05 14:37:35
把提的基因组DNA图片发过来看看,然后你用的引物是不是好的?你PCR的试剂是不是能用?退火温度是不是合适,这都影响PCR,具体可以联系我380270985

那个电泳仪的电脑老师怕U盘传播病毒,没有让拷,不过老师给看的,说DNA可以。至于你说的其他可能性,我也觉得是材料的问题,就是个内参基因都P不出来,运气再查,我也做了一个星期了,都什么也没有,退火温度最低选的42都没有弥散。后来老师让我别P了,现在我忙着设计引物呢,那个就放下了。如果后面我有什么问题,我再联系你吧,谢谢你了!!!
7楼2012-11-05 21:47:44
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romantic昊

新虫 (初入文坛)

请问你还在做棉花这一块吗
8楼2015-10-15 00:55:12
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