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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果很诡异 百思不得其解 求师兄师姐相助
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gissingtan

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果很诡异 百思不得其解 求师兄师姐相助

刚开始做分子生物学实验 这是提取的基因组DNA检测结果 点样用1μl
下一张是PCR结果 用的是上图提取的DNA 应该出现的片段是在一千与两千之间，接近进两千  
想问为何在点样孔下出现那么多拖带现象 PCR的问题出在哪里
各位师兄师姐帮帮忙，我只有两个金币 都给你了

提取的DNA.jpg



PCR结果.jpg
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1楼 2013-04-03 16:59:34
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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1949stone: 金币+2, 不错 2013-04-06 09:18:28
除非你的primer有问题,或者DNA template 不好,否则看样子就一条路,你就涨annealing temperature吧,而且还要涨不少. template不要加多了,越多约不好.PCR很灵敏,条件合适的话,枪尖上沾点,都不用有准确体积就够了
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8楼2013-04-04 15:28:59
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 很好地回答 2013-04-06 09:18:39
扩增弥散，说明，模板太多或者退火温度太低，或者引物不特异，请根据情况，减少模板用量，提高退火温度试试，如果不行就换引物，每次试验尽量加上阴阳对照否则不好分析。。。。。。
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7楼2013-04-04 07:56:31
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yangcongcong

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 鼓励 2013-04-06 09:18:49
1.DNA质量不行   2.反应体系很不合理 3循环数减少10次
人工提DNA很可能是1，要是试剂盒那就2了，可能性很多，一步步联系吧，很正常
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己所不欲勿施于人
9楼2013-04-05 09:06:07
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猪小晨

新虫 (初入文坛)
★
1949stone: 金币+1, MAYBE 2013-04-06 09:24:48
你用低电压 长时间跑一下电泳 我也不太清楚 但是这样跑的效果都不错
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10楼2013-04-05 09:22:53
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守好我的道

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 21:23:36
实验好像是：先提取基因组DNA，再以此为模板，进行PCR的操作。
个人建议：一步一步的确认实验。
首先,基因组DNA的提取，个人建议你做一个浓度低一点的琼脂糖胶，争取能让基因组能够跑出孔，以便与确认基因组的提取效果。个人感觉，你的提取结果不算好，有杂带。同时，PCR的结果不特异，也应该反思第一步的实验。个人建议，用好的基因组提取试剂盒再试一试。
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16楼2013-04-05 15:00:23
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普通回帖

gissingtan

新虫 (初入文坛)
帮帮忙 不知道下一步实验怎么做了
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2楼2013-04-03 17:00:34
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xshe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, MAYBE 2013-04-06 09:24:32
pcr应该是没结果的，没结果很正常的，重P吧，感觉质粒提的可能浓度也不算太高
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3楼2013-04-03 18:10:26
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-06 12:18:25
你用多少微升体系？以前我用50的老做不出来，要么各种杂带。换成25的就好做多了。
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4楼2013-04-03 18:13:02
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Rick001

铁杆木虫 (职业作家)

钓鱼岛环保首席秘书

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
摸摸PCR的条件温度和时间等等，优化一下体系配置
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☆☆☆想开了，便能走出去☆☆☆
5楼2013-04-03 21:07:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励讨论 2013-04-06 09:25:19
PCR没做出来。对提取的DNA模板是否消化了RNA，用了多少模板？
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6楼2013-04-04 02:56:53
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