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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果很诡异 百思不得其解 求师兄师姐相助
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by gissingtan at 2013-04-06 19:53:27
图上的DNA是第一天下午提出来的，胶是第二天早上跑的，白天做了一天PCR都没有结果，所以晚上再次检测了一下DNA,发现都没有DNA了。图中marker 的条带应该是30nk。...

一般提出来的基因组DNA在几十K是正常的，至于碎片什么的，应该是未销户完全的RNA。DNA一般不会一天就降解的。有RNA的样品不影响PCR，但会影响核酸定量，一般是要加RNase消化比较好。
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21楼2013-04-06 23:37:12
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gissingtan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-06 23:37:12
一般提出来的基因组DNA在几十K是正常的，至于碎片什么的，应该是未销户完全的RNA。DNA一般不会一天就降解的。有RNA的样品不影响PCR，但会影响核酸定量，一般是要加RNase消化比较好。...

但是晚上从新跑胶检测时，就没有基因组DNA了是怎么回事？
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22楼2013-04-07 14:21:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
22楼: Originally posted by gissingtan at 2013-04-07 14:21:11
但是晚上从新跑胶检测时，就没有基因组DNA了是怎么回事？...

会不会是样品溶解时没有混匀？你做核酸定量了吗？基因组DNA需要跑大致跑1μg或者以上才能看到清晰的条带。
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23楼2013-04-08 00:26:17
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chenguestc

木虫 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by gissingtan at 2013-04-05 12:31:07
恩，设计的引物特异性不太高。这次提的DNA浓度很低，第一天下午提好的，第二天早上检测的，做了一天pcr总是出问题，晚上再次电泳检测DNA时发现DNA都降解了，以前都没出现过这样的问题，请问是怎么回事...

最大的原因是在分离蛋白的时候可能剧烈震荡了，很多实验室都是加入氯仿异戊醇之后剧烈震荡，这样很容易吧分离出的DNA震碎，我一般是上下混匀5-10分钟，不用太剧烈，这样DNA就相对好很多
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24楼2013-04-08 08:54:26
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