24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1703  |  回复: 23

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by gissingtan at 2013-04-06 19:53:27
图上的DNA是第一天下午提出来的,胶是第二天早上跑的,白天做了一天PCR都没有结果,所以晚上再次检测了一下DNA,发现都没有DNA了。图中marker 的条带应该是30nk。...

一般提出来的基因组DNA在几十K是正常的,至于碎片什么的,应该是未销户完全的RNA。DNA一般不会一天就降解的。有RNA的样品不影响PCR,但会影响核酸定量,一般是要加RNase消化比较好。
21楼2013-04-06 23:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gissingtan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-06 23:37:12
一般提出来的基因组DNA在几十K是正常的,至于碎片什么的,应该是未销户完全的RNA。DNA一般不会一天就降解的。有RNA的样品不影响PCR,但会影响核酸定量,一般是要加RNase消化比较好。...

但是晚上从新跑胶检测时,就没有基因组DNA了是怎么回事?
22楼2013-04-07 14:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
22楼: Originally posted by gissingtan at 2013-04-07 14:21:11
但是晚上从新跑胶检测时,就没有基因组DNA了是怎么回事?...

会不会是样品溶解时没有混匀?你做核酸定量了吗?基因组DNA需要跑大致跑1μg或者以上才能看到清晰的条带。
23楼2013-04-08 00:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

引用回帖:
13楼: Originally posted by gissingtan at 2013-04-05 12:31:07
恩,设计的引物特异性不太高。这次提的DNA浓度很低,第一天下午提好的,第二天早上检测的,做了一天pcr总是出问题,晚上再次电泳检测DNA时发现DNA都降解了,以前都没出现过这样的问题,请问是怎么回事...

最大的原因是在分离蛋白的时候可能剧烈震荡了,很多实验室都是加入氯仿异戊醇之后剧烈震荡,这样很容易吧分离出的DNA震碎,我一般是上下混匀5-10分钟,不用太剧烈,这样DNA就相对好很多
24楼2013-04-08 08:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gissingtan 的主题更新
信息提示
请填处理意见