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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果出现弥散现象
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皇猪

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果出现弥散现象

各位道友：
   最近我做ITS序列标记实验，PCR结果如下图所示，在成像结果中可以看到弥散现象，这是怎么一回事？？？

  对于这个问题，我做了引物梯度实验、DNA模板梯度实验，结果还是一样，
模板DNA的A260/A280比值为1.89,纯度还可以，求研友帮忙分析下，是什么原因造成弥散现象的！！！
PCR结果出现弥散现象
RLBN4JLE$2N5D9C9UYO0KO5.jpg
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
1楼 2013-06-03 19:32:28
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皇猪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by funds at 2013-06-04 09:08:18
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了，PCR不可能出现这种情况的。

我用的是通用引物，应该不会有问题的！！！
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
3楼2013-06-04 12:05:13
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funds

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 12:13:10
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-04 18:13:27
可能是你引物没有设计好的。只要引物设计好了，PCR不可能出现这种情况的。
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2楼2013-06-04 09:08:18
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
皇猪: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-04 14:01:02
但从这张图来看，以我以前碰到的情况，一是模板浓度太高，二是模板不纯，有杂蛋白污染，三是电泳缓冲液不新鲜，不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度，这就奇怪了，是否你的模板没有足够稀释呢，这种情况应该与引物关系不大
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4楼2013-06-04 13:50:08
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皇猪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 13:50:08
但从这张图来看，以我以前碰到的情况，一是模板浓度太高，二是模板不纯，有杂蛋白污染，三是电泳缓冲液不新鲜，不过你说模板纯度好而且做过模板浓度梯度，这就奇怪了，是否你的模板没有足够稀释呢，这种情况应该与引 ...

模板是分管稀释的，保存母板，稀释应该没问题，电泳缓冲液我特意新换了一下，应该也没什么问题，纠结。
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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别
5楼2013-06-04 14:03:24
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