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新虫 (初入文坛)

[求助] 粗提的DNA量太少,pcr都出不来产物,怎样能浓缩一下呢? 已有3人参与

粗提的DNA量太少,pcr都出不来产物,怎样能浓缩一下呢?
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-22 13:38:02
如果是DNA浓缩,可以加1/10体积的3M醋酸钠和两倍体积乙醇沉淀,75%乙醇洗涤,风干后用合适体积无菌水或者TE重新溶解到需要的浓度。
不过PCR所需的DNA模板量只需要很少很少,一般提取的DNA都要稀释后才能做PCR,你确定你PCR不成功是模板浓度不够的原因?
2楼2012-10-21 16:42:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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PCR只需ng级的DNA就可以了,而一般提DNA的浓度是ug/ul级别的。P不出来的原因很多,不一定是模板量不足引起的。你所说的量太少是多少,是否做了定量?
3楼2012-10-22 00:35:04
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提去的DNA,你稀释一下,做个梯度,之后拿去PCR,一般情况下是可以PCR出来的,一般粗提的DNA是不用浓缩的。
宠辱不惊,看庭前花开花落;去留无意,望天上云卷云舒。
4楼2012-10-22 08:46:05
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你测过浓度吗?你确定是浓度低扩增不出东西吗?PCR只需要很少的模板就能扩增出来的!
低调稳重务实内敛---------------残
5楼2012-10-22 09:52:29
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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)

浓缩dna,可以使用BIODAI或者QIAGEN 的盒子的,可以直接浓缩,进行后续pcr实验,效果上还是可以的,比较便捷。
6楼2019-05-20 15:52:37
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PEG沉淀用的最多了,但是我个人觉得没有BIOG便捷,PEG-8000浓缩法:1. 5X PEG8000+NaCl配制 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中;121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min;保存在4℃。2. 滤头过滤慢病毒上清液;3. 每30ml过滤后的病毒初始液,加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml;4. 每20~30min混合一次,共进行3-5次;5. 4度放置过夜;6. 4度,4000 g,离心 20min;7. 吸弃上清,静置管子1~2分钟,吸走残余液体;8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀;9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份,保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃
7楼2020-03-11 13:56:08
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

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加乙醇过一次柱子就好
核酸提取与Taqman诊断
8楼2020-03-12 09:19:52
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小小乌贼

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

就是磨磨叶子,酒精沉淀一下扩pcr也能扩出来,扩不出条带原因很多,要不拿别人已知能扩的模板检验一下你的引物操作等等,正常提DNA浓度很高的

发自小木虫Android客户端
9楼2020-03-12 12:48:45
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