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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 粗提的DNA量太少，pcr都出不来产物，怎样能浓缩一下呢？
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zh6yan

新虫 (初入文坛)

[求助] 粗提的DNA量太少，pcr都出不来产物，怎样能浓缩一下呢？ 已有3人参与

粗提的DNA量太少，pcr都出不来产物，怎样能浓缩一下呢？
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1楼 2012-10-21 16:16:56
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-22 13:38:02
如果是DNA浓缩，可以加1/10体积的3M醋酸钠和两倍体积乙醇沉淀，75%乙醇洗涤，风干后用合适体积无菌水或者TE重新溶解到需要的浓度。
不过PCR所需的DNA模板量只需要很少很少，一般提取的DNA都要稀释后才能做PCR，你确定你PCR不成功是模板浓度不够的原因？
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2楼2012-10-21 16:42:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR只需ng级的DNA就可以了，而一般提DNA的浓度是ug/ul级别的。P不出来的原因很多，不一定是模板量不足引起的。你所说的量太少是多少，是否做了定量？
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3楼2012-10-22 00:35:04
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提去的DNA，你稀释一下，做个梯度，之后拿去PCR，一般情况下是可以PCR出来的，一般粗提的DNA是不用浓缩的。
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
4楼2012-10-22 08:46:05
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你测过浓度吗？你确定是浓度低扩增不出东西吗？PCR只需要很少的模板就能扩增出来的!
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低调稳重务实内敛---------------残
5楼2012-10-22 09:52:29
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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)
浓缩dna，可以使用BIODAI或者QIAGEN 的盒子的，可以直接浓缩，进行后续pcr实验，效果上还是可以的，比较便捷。
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6楼2019-05-20 15:52:37
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PEG沉淀用的最多了，但是我个人觉得没有BIOG便捷，PEG-8000浓缩法：1. 5X PEG8000+NaCl配制 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃。2. 滤头过滤慢病毒上清液；3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml；4. 每20～30min混合一次，共进行3-5次；5. 4度放置过夜；6. 4度，4000 g，离心 20min；7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体；8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃
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7楼2020-03-11 13:56:08
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

加乙醇过一次柱子就好
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核酸提取与Taqman诊断
8楼2020-03-12 09:19:52
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小小乌贼

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

就是磨磨叶子，酒精沉淀一下扩pcr也能扩出来，扩不出条带原因很多，要不拿别人已知能扩的模板检验一下你的引物操作等等，正常提DNA浓度很高的

发自小木虫Android客户端
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9楼2020-03-12 12:48:45
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