24小时热门版块排行榜    

查看: 2943  |  回复: 8

zh6yan

新虫 (初入文坛)

[求助] 粗提的DNA量太少,pcr都出不来产物,怎样能浓缩一下呢? 已有3人参与

粗提的DNA量太少,pcr都出不来产物,怎样能浓缩一下呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-22 13:38:02
如果是DNA浓缩,可以加1/10体积的3M醋酸钠和两倍体积乙醇沉淀,75%乙醇洗涤,风干后用合适体积无菌水或者TE重新溶解到需要的浓度。
不过PCR所需的DNA模板量只需要很少很少,一般提取的DNA都要稀释后才能做PCR,你确定你PCR不成功是模板浓度不够的原因?
2楼2012-10-21 16:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR只需ng级的DNA就可以了,而一般提DNA的浓度是ug/ul级别的。P不出来的原因很多,不一定是模板量不足引起的。你所说的量太少是多少,是否做了定量?
3楼2012-10-22 00:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提去的DNA,你稀释一下,做个梯度,之后拿去PCR,一般情况下是可以PCR出来的,一般粗提的DNA是不用浓缩的。
宠辱不惊,看庭前花开花落;去留无意,望天上云卷云舒。
4楼2012-10-22 08:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你测过浓度吗?你确定是浓度低扩增不出东西吗?PCR只需要很少的模板就能扩增出来的!
低调稳重务实内敛---------------残
5楼2012-10-22 09:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)

浓缩dna,可以使用BIODAI或者QIAGEN 的盒子的,可以直接浓缩,进行后续pcr实验,效果上还是可以的,比较便捷。
6楼2019-05-20 15:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PEG沉淀用的最多了,但是我个人觉得没有BIOG便捷,PEG-8000浓缩法:1. 5X PEG8000+NaCl配制 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中;121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min;保存在4℃。2. 滤头过滤慢病毒上清液;3. 每30ml过滤后的病毒初始液,加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml;4. 每20~30min混合一次,共进行3-5次;5. 4度放置过夜;6. 4度,4000 g,离心 20min;7. 吸弃上清,静置管子1~2分钟,吸走残余液体;8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀;9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份,保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃
7楼2020-03-11 13:56:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

加乙醇过一次柱子就好
核酸提取与Taqman诊断
8楼2020-03-12 09:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小乌贼

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

就是磨磨叶子,酒精沉淀一下扩pcr也能扩出来,扩不出条带原因很多,要不拿别人已知能扩的模板检验一下你的引物操作等等,正常提DNA浓度很高的

发自小木虫Android客户端
9楼2020-03-12 12:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zh6yan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:23 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见