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zh6yan

新虫 (初入文坛)

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[求助] 粗提的DNA量太少，pcr都出不来产物，怎样能浓缩一下呢？已有3人参与

粗提的DNA量太少，pcr都出不来产物，怎样能浓缩一下呢？

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1楼 2012-10-21 16:16:56

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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

PEG沉淀用的最多了，但是我个人觉得没有BIOG便捷，PEG-8000浓缩法：1. 5X PEG8000+NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃。2. 滤头过滤慢病毒上清液；3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml；4. 每20～30min混合一次，共进行3-5次；5. 4度放置过夜；6. 4度，4000 g，离心 20min；7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体；8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃