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1楼 2013-05-07 11:02:07

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小郭tongxue

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绝对会影响的，所以做的时候要提前算好体系中模板的浓度，我一般都是多少微升的反应体系我就加多少ng的模板，效果比较好

2楼2013-05-07 11:30:57

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4楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 11:59:19
感觉不怎么影响啊，现在扩了这么多次也没什么很明显的问题。还有就是到底怎么来看是多少ng啊？？

体积乘浓度啊感觉会有影响

6楼2013-05-07 16:18:23

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cicelyzh

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9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

一般是nanodrop一下，虽然如果样品不是很纯的话有可能不特别准。实在不行的话只有估测。一般确定提DNA的材料用量，提出来的DNA的总量每次都差不多。

12楼2013-05-07 23:26:01

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25ul体系中加1ul模板，模板浓度在50ng/ul左右
这个也许会对你有帮助 http://blog.sina.com.cn/s/blog_58a884680100mz4e.html

努力做一只好虫子

13楼2013-05-08 17:39:57

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cute_man

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有影响，但一般不大，一般25或者50微升的体系加入的模板量30-100ng都不会有问题，模板浓度用分光光度计测定。做到后面就发现，常规pcr其实很粗放的。

15楼2013-05-08 19:51:03

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9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

用Nanodrop测定啊

19楼2013-05-09 17:53:44

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我一般25ul体系加50ng DNA模板

3楼2013-05-07 11:57:42

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感觉不怎么影响啊，现在扩了这么多次也没什么很明显的问题。还有就是到底怎么来看是多少ng啊？？

一花一世界、一叶一菩提

4楼2013-05-07 11:59:19

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3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-07 11:57:42
我一般25ul体系加50ng DNA模板

会不会太少？

5楼2013-05-07 16:17:50

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5楼: Originally posted by 勇敢小飞侠 at 2013-05-07 16:17:50
会不会太少？...

我25ul体系加300ng DNA模板

7楼2013-05-07 16:31:52

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没注意过，一般25ul体系加1ul

8楼2013-05-07 16:57:29

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6楼: Originally posted by 勇敢小飞侠 at 2013-05-07 16:18:23
体积乘浓度啊感觉会有影响...

怎么确定浓度呢 ?

一花一世界、一叶一菩提

9楼2013-05-07 17:06:28

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