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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗？？
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)

[求助] PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗？？

PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗？？
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1楼 2013-05-07 11:02:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小郭tongxue

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-07 16:42:06
绝对会影响的，所以做的时候要提前算好体系中模板的浓度，我一般都是多少微升的反应体系我就加多少ng的模板，效果比较好
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2楼2013-05-07 11:30:57
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 11:59:19
感觉不怎么影响啊，现在扩了这么多次也没什么很明显的问题。还有就是到底怎么来看是多少ng啊？？

体积乘浓度啊  感觉会有影响
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6楼2013-05-07 16:18:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:47:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

一般是nanodrop一下，虽然如果样品不是很纯的话有可能不特别准。实在不行的话只有估测。一般确定提DNA的材料用量，提出来的DNA的总量每次都差不多。
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12楼2013-05-07 23:26:01
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珊珊1025

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:47:52
25ul体系中加1ul模板，模板浓度在50ng/ul左右
这个也许会对你有帮助 http://blog.sina.com.cn/s/blog_58a884680100mz4e.html
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努力做一只好虫子
13楼2013-05-08 17:39:57
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cute_man

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:48:05
有影响，但一般不大，一般25或者50微升的体系加入的模板量30-100ng都不会有问题，模板浓度用分光光度计测定。做到后面就发现，常规pcr其实很粗放的。
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15楼2013-05-08 19:51:03
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zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

用Nanodrop测定啊
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19楼2013-05-09 17:53:44
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普通回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-07 16:43:34
我一般25ul体系加50ng   DNA模板
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3楼2013-05-07 11:57:42
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

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勇敢小飞侠(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-05-08 18:32:13
感觉不怎么影响啊，现在扩了这么多次也没什么很明显的问题。还有就是到底怎么来看是多少ng啊？？
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一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-07 11:59:19
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-07 11:57:42
我一般25ul体系加50ng   DNA模板

会不会太少？
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5楼2013-05-07 16:17:50
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kinner.huang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-07 16:43:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by 勇敢小飞侠 at 2013-05-07 16:17:50
会不会太少？...

我25ul体系加300ng   DNA模板
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7楼2013-05-07 16:31:52
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没注意过，一般25ul体系加1ul
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8楼2013-05-07 16:57:29
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 勇敢小飞侠 at 2013-05-07 16:18:23
体积乘浓度啊  感觉会有影响...

怎么确定浓度呢 ?
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一花一世界、一叶一菩提
9楼2013-05-07 17:06:28
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没注意过，一般25ul体系加1ul
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自己的路，自己快乐的走
10楼2013-05-07 18:49:47
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