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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)

[求助] PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗??

PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗??
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小郭tongxue

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-07 16:42:06
绝对会影响的,所以做的时候要提前算好体系中模板的浓度,我一般都是多少微升的反应体系我就加多少ng的模板,效果比较好
2楼2013-05-07 11:30:57
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 11:59:19
感觉不怎么影响啊,现在扩了这么多次也没什么很明显的问题。还有就是到底怎么来看是多少ng啊??

体积乘浓度啊  感觉会有影响
6楼2013-05-07 16:18:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-09 20:47:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

一般是nanodrop一下,虽然如果样品不是很纯的话有可能不特别准。实在不行的话只有估测。一般确定提DNA的材料用量,提出来的DNA的总量每次都差不多。
12楼2013-05-07 23:26:01
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珊珊1025

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-09 20:47:52
25ul体系中加1ul模板,模板浓度在50ng/ul左右
这个也许会对你有帮助 http://blog.sina.com.cn/s/blog_58a884680100mz4e.html
努力做一只好虫子
13楼2013-05-08 17:39:57
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cute_man

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-09 20:48:05
有影响,但一般不大,一般25或者50微升的体系加入的模板量30-100ng都不会有问题,模板浓度用分光光度计测定。做到后面就发现,常规pcr其实很粗放的。
15楼2013-05-08 19:51:03
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zx1990

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

用Nanodrop测定啊
19楼2013-05-09 17:53:44
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普通回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-07 16:43:34
我一般25ul体系加50ng   DNA模板
3楼2013-05-07 11:57:42
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

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勇敢小飞侠(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-05-08 18:32:13
感觉不怎么影响啊,现在扩了这么多次也没什么很明显的问题。还有就是到底怎么来看是多少ng啊??
一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-07 11:59:19
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-07 11:57:42
我一般25ul体系加50ng   DNA模板

会不会太少?
5楼2013-05-07 16:17:50
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kinner.huang

金虫 (正式写手)

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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-07 16:43:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by 勇敢小飞侠 at 2013-05-07 16:17:50
会不会太少?...

我25ul体系加300ng   DNA模板
7楼2013-05-07 16:31:52
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没注意过,一般25ul体系加1ul
8楼2013-05-07 16:57:29
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

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引用回帖:
6楼: Originally posted by 勇敢小飞侠 at 2013-05-07 16:18:23
体积乘浓度啊  感觉会有影响...

怎么确定浓度呢 ?
一花一世界、一叶一菩提
9楼2013-05-07 17:06:28
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没注意过,一般25ul体系加1ul
自己的路,自己快乐的走
10楼2013-05-07 18:49:47
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