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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于提取DNA的纯度对后续PCR的影响
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aixiaoxi123

铁虫 (初入文坛)

[交流] 关于提取DNA的纯度对后续PCR的影响

科研新手，请教大家用试剂盒提取的DNA的纯度对后续的PCR和QPCR有什么影响？还有大家一般提取的核酸的浓度是多少？用多大浓度的DNA模板做PCR效果比较好？希望大家多多指教，先谢谢啦
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1楼 2012-05-06 16:53:15
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hxs-520

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-06 21:04:15
aixiaoxi123: 金币+2 2012-05-11 20:35:21
5-50ng 的浓度就会得到很理想的结果，而且DNA提取试剂盒都是已经商业化的技术，在纯度上肯定不会有很大的出入。祝你试验顺利。
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aixiaoxi123
2楼2012-05-06 18:34:56
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dabinyang

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-06 21:04:20
aixiaoxi123: 金币+1 2012-05-11 20:35:47
看你做什么的，如果做普通PCR，循环数在30以内，没有什么影响，现在都还有把一小块组织直接拿去PCR的产品那。
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3楼2012-05-06 19:52:33
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aixiaoxi123

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hxs-520 at 2012-05-06 18:34:56:
5-50ng 的浓度就会得到很理想的结果，而且DNA提取试剂盒都是已经商业化的技术，在纯度上肯定不会有很大的出入。祝你试验顺利。

我是怕模版不纯会影响后期的PCR结果，比如有蛋白质或其他物质的抑制作用等等，那你看会不会呢？
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4楼2012-05-07 09:51:59
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aixiaoxi123

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dabinyang at 2012-05-06 19:52:33:
看你做什么的，如果做普通PCR，循环数在30以内，没有什么影响，现在都还有把一小块组织直接拿去PCR的产品那。

如果后期还想做定量PCR呢？想让结果比较可靠点
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5楼2012-05-07 09:52:48
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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zhaohq1209: 金币+2, 鼓励回帖交流~ 2012-05-08 06:35:56
aixiaoxi123: 金币+1 2012-05-11 20:36:07
如果后期要做定量只要里面没有RNA的污染，并且定量前做好浓度监测，就不会有太大的问题，否则你非要考虑起始浓度影响就要选择其他方式来进行DNA定量了，至于蛋白的污染如果跑普通PCR电泳的时候会在上样孔的地方显示特别亮，至于定量时蛋白污染的问题我就不知道了。
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6楼2012-05-07 13:41:16
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dabinyang

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
aixiaoxi123: 金币+1 2012-05-11 20:36:16
引用回帖:
5楼: Originally posted by aixiaoxi123 at 2012-05-07 09:52:48:
如果后期还想做定量PCR呢？想让结果比较可靠点

看你定量的方法，相对定量和总浓度没太大关系。
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7楼2012-05-08 01:33:50
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fangfeiyayun

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你要是担心纯度的话，可以在纯化一次，用试剂盒纯化即可。
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8楼2012-05-09 07:36:36
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