24小时热门版块排行榜    

查看: 1726  |  回复: 5
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

fancrystalli

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤中含有农药,提取的土壤DNA进行PCR扩增,农药会抑制PCR反应吗

最近在做土壤微生态研究,目的是研究土壤中添加农药后对土壤中微生物的影响,取样在农药施用一个月内,具体残留还未做。现在用的是MOBIO公司的power DNA提取试剂盒,按照大多数人的说法,这已经是很好的而且用的很广的土壤DNA提取试剂盒了,提取出来的DNA电泳可见,但就是PCR得不到目的条带,阳性对照成功扩增出,采用降落PCR,将样品进行过10~50倍的稀释,仍扩增失败。想请教有经验的前辈,会不会是因为土壤中的农药残留对PCR产生了抑制,如果是的话,应该怎样处理?在此,先谢谢大家了。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助。楼主说的对照可能不是土壤样品吧。 2011-06-15 21:47:40
农药应该不会抑制PCR反应,因为你的阳性对照能P出来

可能还是引物有问题
2楼2011-06-15 19:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): good! 2011-06-15 21:50:56
农药一般不会抑制DNA聚合酶活性,而抑制胆碱酯酶活性的较多,农药大多是神经毒剂,一般导致昆虫过度兴奋而死,反过来说,几乎没有农药设计DNA聚合酶为靶点。而除草剂一般分为激素类、光合抑制类、阻抑氨基酸、脂类合成、抑制细胞分裂等,也不会抑制DNA聚合酶。

再说,你用的试剂盒我也在用,相当好。提纯的DNA不会带有土壤中DNA以外的物质,水除外。
3楼2011-06-15 20:41:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fancrystalli

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-06-15 19:55:00:
农药应该不会抑制PCR反应,因为你的阳性对照能P出来

可能还是引物有问题

阳性对照是纯细菌的染色体DNA,引物用的是16S V3区通用引物,阳性对照已经扩增出来了,引物应该没问题吧
4楼2011-06-16 09:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabing0324

金虫 (职业作家)

现在扩出来了没呢?祝好运
5楼2011-07-04 11:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jzhe961

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

好多农药都是脂溶性的,提取DNA时进入氯仿相而被除去。
6楼2011-07-04 11:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fancrystalli 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 博士推荐 +5 花儿笑? 2026-02-21 6/300 2026-02-28 18:53 by nxgogo
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +7 南迦720 2026-02-28 7/350 2026-02-28 18:28 by leonnulll
[考研] 材料学调剂 +4 提神豆沙包 2026-02-28 4/200 2026-02-28 18:26 by houyaoxu
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:20 by liqiongjy
[教师之家] 版面费该交吗 +15 苹果在哪里 2026-02-22 18/900 2026-02-28 18:20 by mibaomingg
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考研] 材料类求调剂 +4 wana_kiko 2026-02-28 4/200 2026-02-28 18:08 by djennjx
[考研] 求调剂 +3 repeatt?t 2026-02-28 3/150 2026-02-28 18:00 by houyaoxu
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考博] 26申博 +3 想申博! 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 290求调剂 +4 材料专硕调剂; 2026-02-28 5/250 2026-02-28 13:32 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见